2.引物设计时还需注意以下几点：引物内部不应有互补序列，以免形成双链结构；两个引物之间也不应互补重叠，特别是3&#39；端，以防止非特异性结合。3.遵循PCR引物设计的11条黄金法则，包括在模板cDNA的保守区域设计引物，这通常是通过比较不同物种间的相似序列来确定的。4.引物的长度一般应在15至30个核苷酸之间，有效长度（计算公式为Ln=2(G+C)+(A+T)）应小于38，以免PCR最适延伸温度过高，超出Taq酶的最佳工作温度，降低产物的特异性。5.PCR引物设计的根本目的是选择一对适当的核苷酸片段，以便有效扩增模板DNA序列。引物的质量直接影响PCR的特异性和成功率。