斋藤一，CV：鸟海浩辅。他是沉默的一匹狼，合掌百鬼夜行狼牙现，新选组三番组组长，左撇子居合斩高手。流派为无外流、一刀流，剑术在新选组中也是数一数二的。斋藤是土方的拥护者，队里最尊敬的就是土方，当然对副长的命令绝对服从。虽然外貌给人的印象是沉默寡言，但他还不完全是无口，只是说话简洁，没有废话，把感情藏得很深，平时很容易被忽略。在第十二话中，斋藤和土方等人经历了“鸟羽伏见之战”后迁至江户。第二季中，随土方所率领的新选组被编入旧幕府军，为忠心于幕府的松平容保公效力。第七集中，斋藤的武士精神感染了部下。在总督大鸟圭介的撤退令下，土方等人不得不离开会津，前往仙台备战。斋藤却请求留下。在高久村率部迎击新政府军，最后冲向敌人的枪炮中，生死未卜。