1、从小鼠胚胎中分离内质细胞团（Innercellmass，ICM），通常可以通过取出小鼠早期胚胎的八细胞期或16细胞期的胚胎内细胞来获得。2、将获取到的内细胞团进行细胞培养，加入特定的培养基和生长因子，例如LIF（leukemiainhibitoryfactor）。3、细胞培养过程中，内细胞团中的细胞会逐渐分化、定向和重新编程，产生胚胎干细胞。可以通过观察细胞的形态、染色体形态和分化标记基因等指标来判断是否获得了胚胎干细胞。