ELISA技术中最常用的底物是四甲基联苯胺（TMB）。四甲基联苯胺（TMB）是一种常用的酶底物，在ELISA技术中应用广泛。TMB经HRP作用后变为蓝色，加入硫酸终止反应后变为黄色，最大吸收峰波长450nm。TMB稳定性好，成色无需避光，无致突变作用，是ELISA中应用最广泛的底物。TMB也有一定的缺点，水溶性差。尽管如此，TMB因其优良的稳定性和高灵敏度而被广泛使用。除了TMB之外，还有一些其常用的底物，如邻苯二胺（OPD）、5-氨基水杨酸（5-ASA）和2，2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）等。这些底物在ELISA技术中也有一定的应用，但TMB是最常用的底物。