1、非特异性扩增，PCR反应时间过长可能导致非特异性扩增增加，从而降低特异性扩增产物的荧光信号。2、荧光淬灭，荧光染料在PCR过程中可能会发生淬灭现象，导致荧光信号降低。在PCR反应时间过长的情况下，荧光淬灭的可能性增加。3、酶失活，PCR反应时间过长可能导致DNA聚合酶失活，从而降低扩增效率和荧光信号。4、探针降解，探针在PCR反应过程中可能会发生降解，导致荧光信号降低。5、引物二聚体，PCR反应时间过长可能导致引物二聚体形成增加，从而降低特异性扩增产物的荧光信号。