低温保存的方法

1、低温保存又称最小生长法保存，是20世纪70年代发展起来的新兴技术。

2、这种保存方法是将外植体所再生的试管苗在低温条件下，结合某些特定的培养基如增加蔗糖浓度、添加甘露醇、山梨醇、脱落酸等生长延缓因子，辅以培养环境的，从而抑制或延缓生长，延长寿命，达到保存种质的目的。保存物处于无生长或缓慢生长状态下，需要时可迅速恢复生长。抑制生长的外植体可以是茎尖、茎段以及愈伤组织，但一般多用顶端分生组织作为外植体。

3、这些外植体取材容易，生活力的鉴定一目了然，需要时繁殖迅速。其主要的研究内容是，在低于正常培养所需光照、温度条件下筛选合适的生长延缓因子及其浓度，探讨保存材料最长保存时间及其存活率和再生率，分析其遗传稳定性，以优化最佳的保存条件。这种保存方法经几十年的发展，技术上较完善，基本上可在保证有较高的存活率和较低的变异率的前提下，保存植物种质资源0.51年或几年。

4、1986年，国际植物遗传资源委员会出版的《试管苗基因库计划和操作》一书中，首先支持木薯、甘薯、可可、香蕉、柑橘等作物试管苗保存研究。国际热带农业研究中心建立了木薯试管苗保存库，收集了3500多份木薯，已有50%以上的材料贮藏在生长缓慢的试管苗基因库中。国际马铃薯中心已进行了甘薯试管苗保存研究。荷兰Wageningen农业大学已研究了椰子、香蕉、甘薯等的低温保存，并将芋组织培养在黑暗及9摄氏度条件下，保存了42个月后，其存活率为100%。