实验一 大黄中游离蒽醌的提取分离及鉴定

大黄种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄（RheumPalmatum.L）、 大黄R.officinale Baill）及唐古特大黄（R.tanguticum Maxiim et Regll）的根茎及根。

蒽醌类化合物在植物体内主要以苷的形式存在，其中有大黄酸-葡萄糖苷；大黄素甲醚-葡萄糖苷；芦荟大黄素-葡萄糖苷；大黄素-葡萄糖苷；大黄酸双葡萄糖苷等。

此外尚含鞣质类成分如葡萄糖没食子鞣质，儿茶鞣质、没食子酸等。

大黄中还含有属于双蒽酮的番泻苷A及番泻苷B。

蒽苷内服后有致泻、清热解毒作用，尤其是大黄酸葡萄糖苷有较强的致泻作用。游离的羟基蒽醌如大黄酸、大黄素有明显的抗菌活性。

本品黄色针状结晶（升华法），熔点321～322℃，330℃分解。几乎不溶于水，溶于碱、乙醇、苯、三氯甲烷、乙醚和石油醚。UVλMeOHMaxnm（ε）：229（36800），258（20100），435（11100），IRνcm-1：1701（羧基），1637（鳌合C＝O）。

1．大黄酸（Rhein）

本品系橙黄色长结晶（丙酮），C15H10O5，在有机溶媒的溶解度情况如下（25Cw／w）：四氯化碳0.01％；苯0.041％；三氯甲烷0.071％；乙醚0.14％，几乎不溶于水，溶于乙醇及氢氧化钠，碳酸钠，氨水溶液中。13CNMR（DMSO-d6）：1.32 （C-1），107.71（C-2），165.40（C-3），168.68（C-4），120.22（C-5），148.04（C-6），123.88（C-7），161.19（C-8），1.44（C-9），180.92（C-10），132.51（C-11），112.99（C-12），108.68（C-13），134.77（C-14），21.44（C-CH3）。

2．大黄素（Emodin）

砖红色单斜状结晶，溶点207～209℃。溶于苯、三氯甲烷、甲苯、乙醇、冰醋酸、不溶于乙醚和丙酮。UVλMeOH max nm（logε）：266（4.45），255（4.22），267（4.25），288（4.22），440（4.02）IRνcm-1：1625（C＝O，螯合），1668（C＝O，游离），1570（C＝O），3400（OH）。

3．大黄素甲醚（Physcion）

本品六方形或单斜形结晶（乙醇或苯），熔点196℃；升华，几乎不溶于水，略溶于冷乙醇，易溶于沸乙醇，溶于苯、三氯甲烷、乙醚及丙酮等。IRvcm-l：1680，1630，1607；UVλ MeoHmaxnm（logε）：224（4.73），257（4.48），277（4.18），287（4.18），429(4.14)；MSm／e（％）：254（100）。

4．大黄酚（Chrysophanol）

5．芦荟大黄素（Aloe emodin）

橙色针状结晶（甲苯），熔点223～224℃。

易溶于热乙醚。

在乙醚及苯中呈黄色，氨水及硫酸中呈绯红色。

[目的要求]：

1．掌握蒽醌及蒽醌衍生物的理化性质及提取分离方法。

2．掌握双相酸水解的原理及操作。

3．掌握液－液萃取的原理及操作。

4．掌握制备薄层的原理及操作。

5．掌握蒽醌类成分的各类检识方法。

[实验原理]

（*此项内容由学生自行预习、归纳并整理）

[实验内容]

一、大黄中总游离蒽醌成分的提取分离

1. 双相酸水解

2. pH梯度萃取法

  3. 制备薄层分离

取沉淀Ⅲ适量，加甲醇1ml使溶解，条状点样于硅胶G制备薄层板上，以石油醚－乙酸乙酯（8：2）为展开剂，展开，取出，晾干，定位，刮取色谱带，用适量甲醇溶解，滤过，回收溶剂至干，依次得样品Ⅲa、Ⅲb、Ⅲc。

二、蒽醌类化合物的鉴定

1．化学检识

（1）Brontrager’s反应

取样品适量，加2％NaOH溶液数滴，观察颜色变化。

（2）醋酸镁反应

取样品适量，加乙醇数滴使溶解，滴加0.5％醋酸镁乙醇溶液数滴，观察颜色变化。

（3）浓硫酸反应

取样品适量，滴加浓硫酸，观察颜色变化。

2．薄层检识

吸附剂：硅胶G 

展开剂：石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯（8：2）

检视：先在紫外光灯（365nm）下观察，再用氨气熏蒸后观察。

3．紫外光谱测定

取样品适量，加色谱甲醇使溶解，作为供试品溶液，测紫外吸收光谱图。

 [实验说明及注意事项]

1．注意碱液浓度及萃取时的静置时间对实验结果的影响。

2．加HCl酸化时产生气体，小心内容物溢出。

[思考题]

1．PH梯度萃取法的原理是什么？适用哪些中药化学成分的分离？

2．根据大黄中所含五种羟基蒽醌的结构，各游离蒽醌化合物的酸性及极性强弱应如何排列？说明为什么它们可以分别被不同强度的碱性水溶液提取出来？

3．根据大黄中游离蒽醌性质，除用双相酸水解法提取外，尚可用哪些提取方法？请设计一个详细工艺流程。

[预习要求]

1．根据实验目的要求归纳总结实验原理。

2．请根据本次实验流程列出实验所需试剂、试药，仪器及装置。

3．推测实验现象及结果。