实验六 奶粉中亚钠含量的测定

一、实验目的    

1.掌握样品制备、提取的基本操作技能。    

2.进一步熟练掌握分光光度计的结构和使用方法。 

3.掌握比色法测定食品中亚盐的原理和方法。 

二、仪器与试剂

1仪器    ①分光光度计；②比色管、移液管、容量瓶等常用玻璃仪器 

2试剂     

①亚铁溶液：称取10.6g亚铁溶于水，并定容至100ml。  

②乙酸锌溶液：称取22.0g乙酸锌，加30ml冰醋酸，溶于水并定容至100ml。  

③硼砂饱和溶液：称取5g硼砂溶于100 ml热水中，冷却后备用。 

④0.4%对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100 ml 20%的盐酸中，避光保存。 

⑤0.2%盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2g盐酸萘乙二胺,溶于100 ml水中，避光保存。   

⑥亚钠标准溶液：准确称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥24h的亚钠，加水溶解移入500 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于200μg的亚钠；

⑦亚钠标准使用液：临用前，吸取亚钠标准溶液5.00mL，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于10.0μg亚钠。 

三、原理 

样品经沉淀分离蛋白质，除去脂肪后，在弱酸的条件下，亚盐与对氨基苯磺酸起重氮化反应，生成重氮化合物，再与盐酸萘乙二胺偶合，形成紫红色的的染料，其颜色的深浅与亚盐的含量成正比，可与标准比较定量。通过分光光度计比色测定，计算出样品中亚盐的含量。

四、实验步骤

准确称取奶粉2.50克于50ml烧杯中，加硼砂饱和溶液6.3ml，以70℃以上的热水100～150ml将样品搅拌均匀后，全部洗入250ml容量瓶中，放入沸水浴中加热15分钟，取出冷却后，边转动容量瓶边加入亚铁溶液2.5ml，摇匀后，再加入乙酸锌溶液2.5ml，以沉淀蛋白质。然后，加水至刻度，混匀，放置半小时后，弃去上层脂肪，清液用滤纸或脱脂棉过滤，弃去初滤液5～10ml，滤液备用

2测定    吸取上述滤液20ml于25ml带塞比色管中，同时吸取0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50ml 10.0ug/mL的亚钠标准溶液（相当于0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ug/25mL的亚钠）分别置于25ml比色管中。 在样品管及标准管中分别加入0.4%对氨基苯磺酸溶液1ml，混匀后静置3～5分钟，然后又在各管及标准管中分别加入0.2%盐酸萘乙二胺溶液0.5ml，加水至刻度，摇匀，静置15分钟后，用1cm的比色皿，以零管调节零点，于波长538nm处，测吸光度。并查出待测液的亚盐含量。 

3、求出线性回归方程，并以回归方程绘制标准曲线，用回归方程求出奶粉中含亚盐的量，计算线性相关系数及相对误差。

式中：X—样品中亚盐的含量，mg/kg；       

C—样品溶液中亚盐的含量，ug；       

m—样品的质量，g。         

五、数据记录与处理

1、工作曲线的绘制： 以亚钠含量为横坐标，以吸光度为纵坐标，做标准曲线。

根据样品的吸光度从工作曲线中查出样品的亚钠含量Ｃ，并通过上述公式计算奶粉中亚钠含量。