超级实用的实验室常用试剂缓冲液的配制方法

实验室常用试剂、缓冲液的配制方法

1 M Tris-HCl (pH7.4，7.6，8.0)

组份浓度  1 M Tris-HCl

配制量    1L

配制方法  1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。

            2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

            3.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。

pH值	浓HCl
7.4	约70 ml
7.6	约60 ml
8.0	约42ml

4.将溶液定容至1 L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高l℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1.5 M Tris-HCl (pH8.8)          

   组份浓度  1.5 MTris-HCl

配制量    1 L

配制方法  1.称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。

            2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

            3.用浓HCl调节pH值至8.8。

            4.将溶液定容至1 L。

            5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高l℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6，8.0)         

 组份浓度  100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA

 配制量    1 L

 配制方法  1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。

1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4，7.6，8.0)	100 ml
500 mM EDTA(pH8.0)	20 ml

            2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。 

            3.将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。

            4.室温保存。

3 M醋酸钠(pH5.2)            

 组份浓度  3 M醋酸钠

 配制量    100 ml

 配制方法  1.称量40.8 g NaOAc·3H2O置于100~200 ml烧杯中，加入约40 ml的去离子水搅拌溶解。

            2.加入冰醋酸调节pH值至5.2。

            3.加去离子水将溶液定容至100 ml。

            4.高温高压灭菌后，室温保存。

PBS Buffer            

 组份浓度  137 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 

 配制量    1 L

 配制方法  1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。

NaCl	8 g
KCl	0.2 g
Na2HPO4	1.42 g
KH2PO4	0.27 g

            2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

            3.滴加浓HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。

            4.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

10 M醋酸铵    

组份浓度  10 M醋酸铵

配制量    100 ml

配制方法  1.称量77.1 g醋酸铵置于100~200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。

            2.加去离子水将溶液定容至100 ml。

            3.使用0.22 µm滤膜过滤除菌。

4.密封瓶，室温保存。

注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

Tris-HCl平衡苯酚    

配制方法  1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须，160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

          2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

            3.苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

            ①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。

            ②加入羟基喹啉(8-Qulnollnol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。

    ③加入等体积的1 M Tris-HCl(pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌l5min，静置使其充分分层后，除去上层水相。

            ④重复操作步骤③。

            ⑤加入等体积的0.1 M Tris-HCl(pH8.0)。使用磁力搅拌器搅拌l5min，静置使其充分分层后，除去上层水相。

            ⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。

            ⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

            ⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

苯酚/氯仿/异戊醇  

配制方法  l.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚，氯仿/异戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。  

            2.配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

10%(W/V)SDS    

组份浓度  10%(W/V)SDS

配制量    100 ml

配制方法  1.称量10 g高纯度的SDS置于100~200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水，68℃加热溶解。

            2.滴加浓HCl调节pH值至7.2。

            3.将溶液定容至100 ml后，室温保存。

2 N NaOH    

组份浓度  2 N NaOH

配制量    100 ml

配制方法  1.量取80 ml去离子水置于100~200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。

            2.称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

            3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至100 ml。

            4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

2.5 N HCl    

组份浓度  2.5 N HCl

配制量    100 ml

配制方法  1.在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓HCl(11.6 N)，均匀混合。

            2.室温保存。

5 M NaCl    

组份浓度  5 M NaCl

配制量    1 L

配制方法  1.称量292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。

            2加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。    

            3.高温高压灭菌后，4℃保存。

20%(W/V)Glucose(葡萄糖)

组份浓度  20%(W/V)Glucose

配制量    100 ml 

配制方法  1.称取20 g Glucose置于100~200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后。搅拌溶解。

            2.加去离子水将溶液定容至l 00 ml。

            3.高温高压灭菌后，4℃保存。

Solution l (质粒提取用)

   组份浓度  25 mM Tris-HCl(pH8.0)，10 mM EDTA，50 mM Glucose

配制量    1 L

配制方法  1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。

1 M Tris-HCl(pH8.0)	25 m
0.5 M EDTA(pH8.0)	20 m
20% Glucose(1.11 M)	45 m
dH2O	910 m

            2.高温高压灭菌后，4℃保存。

            3.使用前每50 ml的Solution l中加入2 ml的RNase A(20 mg/ml)。

Solution Ⅱ(质粒提取用)

组份浓度  200 mM NaOH，1%(W/V)SDS

配制量    500 ml

配制方法  1.量取下列溶液，置于500 ml烧杯中。

10%SDS	50 ml
2NNa0H	50 ml

            2.加灭菌水定容至500 ml，充分混匀。

            3.室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。

注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

Sol ution Ⅲ(质粒提取用)

组份浓度  3 M KOAc，5 M Ethanoic acid (乙酸)

配制量    500 ml

配制方法  1.称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。

KOAc	147g
Ethanoic acid	57.5ml

            2.加入300 ml去离子水后搅拌溶解。

            3.加去离子水将溶液定容至500 ml。

            4.高温高压灭菌后，4℃保存。

0.5 M EDTA (pH8.0)  

组份浓度  0.5 M EDTA

配制量    1 L

配制方法  1.称取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。

            2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。

            3.用NaOH调节pH值至8.0(约20gNaOH)。

             注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

            4加去离子水将溶液定容至1 L。

            5.适量分成小份后，高温高压灭菌。

            6.室温保存。

1 M DTT    

组份浓度  1 M DTT

配制量    20 ml

配制方法  1.称取3.09 g DTT，加入到50 ml料离心管内。

            2.加20 ml的0.01 M NaOAc(pH5.2)，溶解后使用0 22 µm滤膜过滤除菌。

            3.适量分成小份后，-20℃保存。

10 mM ATP    

组份浓度  10 mM ATP

配制量    20 mL

配制方法  1.称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。

            2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl(pH8.0)，搅拌溶解。

            3.适量分成小份后，-20℃保存。

二、蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法

30%(W/V)Acrylamide(丙烯酰胺)

组份浓度  30%(W/V)Acrylamide

配制量    1 L

配制方法  1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。

Acrylamide	290 g
BIS(双丙烯酰胺)	10 g

            2.向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

            3.加去离子水将溶液定容至l L，用0.45 µm滤膜滤去杂质。

            4.于棕色瓶中4℃保存。

注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。

40%(W/V)Acrylamide  

组份浓度  40%(W/V)Acrylamide

配制量    1 L

配制方法  1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。

Acrylamide	380 g
BIS	20 g

            2.向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

            3.加去离子水将溶液定容至l L，用0.45 µm滤膜滤去杂质。

            4.于棕色瓶中4℃保存。

注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。

10%(W/V) AP (过硫酸铵)

组份浓度  10%(W/V)AP

配制量    10 ml

配制方法  1.称取1 g AP。

            2.加入10 ml的去离子水后搅拌溶解。

            3.贮存于4℃。

注意：1 0%过硫酸铵溶液在4℃保存时可使用2周左右，超过期限会失去催化作用。

5×Tris-Glyclne Buffer (SDS-PAGE电泳缓冲液)

组份浓度  0.125 M Tris，1.25 M Glyclne(甘氨酸)，0.5%(W/V)SDS

配制量    1 L

配制方法  1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。

Tris	15.1 g
Glyclne	94 g
SDS	5.0 g

            2.加入约800 ml的去离子水，搅拌溶解。

            3.加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。

2×SDS -PAGE Loading Buffer

组份浓度

100 mM	Tris-HCl(pH6.8)
100 mM	β-巯基乙醇(2-ME)
4%(W/V)	SDS
0.2%(W/V)	溴酚兰(BPB)
20%(V/V)	甘油

配制量    5 ml

配制方法  1.量取下列试剂，置于10 ml塑料离心管中。

0.25 M Tris-HCl(pH6.8)	0.25 ml
β-巯基乙醇	0.5 ml
SDS	0.2 g
甘油	1 ml
1%溴酚兰	0.1 ml，

2.加去离子水溶解后定容至5 ml。

            3.小份(500 µl/份)分装后，于室温保存。

            4.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右

5×SDS-PAGE Loading Buffer

250 mM	Tris-HCl(pH6.8)
10%(W/V)	SDS
0.5%(W/V)	BPB
50%(V/V)	甘油
5%(W/V)	2-ME

组份浓度

配制量    5 ml

配制方法  1.量取下列试剂，置于10 ml塑料离心管中。

1 M Tris-HCl(pH6.8)	1.25 ml
SDS	0.5 g
BPB	25 mg
甘油	2.5 ml

              

            

2.加去离子水溶解后定容至5 ml。

            3.小份(500 µl/份)分装后，于室温保存。

            4.使用前将25 µl的2-ME加到每小份中。

            5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右。

考马斯亮蓝R-250染色液

组份浓度  0.1%(W/V)考马斯亮蓝R-250，25%(V/V)异丙醇，10%(V/V)冰醋酸

配制量    1 L

配制方法  1.称取1 g考马斯亮蓝R-250，置于1 L烧杯中。

            2.量取250 ml的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。

            3.加入100 ml的冰醋酸，搅拌均匀。

            4.加入650 ml的去离子水，搅拌均匀。

            5.用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。

考马斯亮蓝染色脱色液     

 组份浓度   10%(V/V) Ethanoic acid，30%(V/V)乙醇

 配制量     1 L

 配制方法   1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。

Ethanoic acid	100 ml
乙醇	300 ml
dH2O	600 ml

              2.充分混合后使用。

凝胶固定液(SDS-PAGE银氨染色用) 

组份浓度   50%(V/V)甲醇，10%(V/V) Ethanoic acid 

配制量     100 ml

配制方法   1.量取下列试剂，加入100~200 ml的试剂瓶中。

甲醇	500 ml
Ethanoic acid	100 ml
dH2O	400 ml

             2.均匀混合后室温保存。

凝胶处理液(SDS-PAGE银氨染色用) 

组份浓度   50%(V/V)甲醇，10%(V/V)戊二醛

配制量     100 ml

配制方法   1.量取下列试剂，加入100~200 ml的试剂瓶中。

甲醇	50 ml
戊二醛	10 ml
dH2O	40 ml

             2.均匀混合后室温保存。

显影液  (SDS-PAGE银氨染色用)

组份浓度   0.005%(W/V)柠檬酸，0.02%(V/V)甲醛

配制量     1 L

配制方法   1.称量下列试剂，置于l L试剂瓶中。

柠檬酸	50 mg
甲醛	0.2 ml

             2.加入1 L去离子水后，摇动混合溶解。

             3.室温保存。