029-生姜原料检验标准操作规程

范  围：适用于生姜原料的入厂检验。

职  责： 

QC检验员：严格按检验操作规程进行检验。

QC主任：监督检查执行情况。

内  容：

1、检品名称：生姜原料        

2、检验依据：《生姜原料质量标准》（STP-ZL-YL-029-01）

3、取样方法：《中药材取样标准操作规程》（SOP-ZL-QY-001-01）

4、质量指标：

5.1性状：

5.1.1仪器与用具：

5.1.1.1直尺

5.1.1.2放大镜

5.1.2试药与试液：无                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                          

5.1.3操作方法

取供试品，目视或用放大镜观察形状，并用直尺测量其长度、厚度；闻其气，尝其味。

5.1.4记录

记录观察到的供试品形状，测量的长度、厚度数据，品尝到的气、味。

5.1.5结果判定

本品呈不规则块状，略扁，具指状分枝，长4～18cm，厚1～3cm。表面黄褐色或灰棕色，有环节，分枝顶端有茎痕或芽。质脆，易折断，断面浅黄色，内皮层环纹明显，维管束散在。气香特异，味辛辣。

符合以上特征者，判为符合规定。

5.2鉴别

5.2.1显微鉴别：照《显微鉴别法标准操作规程》（S0P-ZL-TY-003-01）测定。 

5.2.1.1仪器与用具：

5.2.1.1.1生物光学显微镜：应配有目镜测微尺和载物台测微尺。

5.2.1.1.2载玻片、盖玻片

5.2.1.1.3镊子

5.2.1.1.4酒精灯

5.2.1.2试药与试液：                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                            

5.2.1.2.1三氯甲烷、甘油、醋酸，均为分析纯

5.2.1.2.2水合氯醛试液：取水合氯醛50g，加水15ml与甘油10ml使溶解，即得。

5.2.1.2.3甘油醋酸试液：取甘油、50%醋酸与水各1份，混合，即得。

5.2.1.2.4试验用水：纯化水。

5.2.1.3操作方法

取供试品欲观察部位，经软化处理后，用徒手或滑走切片法，切成10～20μm的薄片，必要时可包埋后切片。选取平整的薄片置载玻片上，根据观察对象不同，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他试液1～2滴，盖上盖玻片。必要时滴加水合氯醛试液后，在酒精灯上加热透化，并滴加甘油乙醇试液或稀甘油，盖上盖玻片，在显微镜下观察。

5.2.1.4记录

记录供试品横切面的显微鉴别特征。

5.2.1.5结果判定

5.2.1.5.1技术指标：

本品横切面:木栓层为多列木栓细胞。皮层中散有外韧型叶迹维管束；内皮层明显，可见凯氏带。中柱占根茎大部分,有多数外韧型维管束散列，近中柱鞘部位维管束形小，排列紧密，木质部内侧或周围有非木化的纤维束。薄壁组织中散有多数油细胞；并含淀粉粒。

5.2.1.5.2根据观察、记录的样品显微特征，与标准规定内容比较是否相符，相符判为符合规定，不相符判为不符合规定。

5.2.2薄层鉴别：照《薄层鉴别法检验标准操作规程》（SOP-ZL-TY-007-01）测定。

5.2.2.2.1仪器与用具：

5.2.2.2.1.1天平

5.2.2.2.1.2烧杯、量筒、容量瓶、刻度吸管、漏斗、滤纸等。

5.2.2.2.1.3干燥器：底层放有硅胶干燥剂。

5.2.2.2.1.4硅胶G薄层板：市售，固定相为硅胶G。

5.2.2.2.1.5点样器：10ul手动点样器

5.2.2.2.1.6展开缸：专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。

5.2.2.2.1.7超声波清洗器

5.2.2.2.2试药与试液：

5.2.2.2.2.1乙酸乙酯：分析纯。

5.2.2.2.2.2甲醇：分析纯。

5.2.2.2.2.3氯仿：分析纯。

5.2.2.2.2.4石油醚(60～90℃)：分析纯。

5.2.2.2.2.5香草醛硫酸试液：取香草醛0.1g，加硫酸10ml使溶解，即得。

5.2.2.2.2.6对照品：6-姜辣素对照品。

5.2.2.2.3操作步骤

取本品碎末1g，加乙酸乙酯20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取6-姜辣素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液6μl、对照品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-三氯甲烷-乙酸乙酯(2：1：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰。5.2.2.4记录：

记录供试品和对照品的用量，吸附剂、展开剂种类及其配比、点样量、薄层色谱图及结果。

5.2.2.2.5结果判定：

5.2.2.2.5.1技术指标：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

5.2.2.2.5.2结果判定：供试品的薄层色谱特征，与对照品的薄层色谱特征比较是否相符，相符判为符合规定，不相符判为不符合规定。

5.3总灰分：照《灰分测定标准操作规程》（S0P-ZL-TY-020-01）中总灰分测定法测定。

5.3.1仪器与用具：

5.3.1.1天平

5.3.1.2马福炉

5.3.1.3坩埚

5.3.1.4干燥器：底层放有硅胶干燥剂。

5.3.2试药与试液：

5.3.3操作方法：

取供试品粉碎后过2号筛，并混合均匀。精密称取该细粉约2～3g，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化并至恒重，根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。

5.3.4记录与计算

5.3.4.1记录供试品称样量、炽灼温度、炽灼时间、灰分的计算和结果。

5.3.4.2计算公式：

式中：X为样品中的总灰分含量，单位为%；

      M1为恒重好的坩埚重量，单位为g；

      M2为恒重前样品和坩埚的总重量，单位为g；

      M3为恒重后样品和坩埚的总重量，单位为g；         

5.3.5结果判定：

5.3.5.1技术指标：总灰分含量不得过1.9%。

5.3.5.2结果判定：计算结果，按有效数字修约规则修约，使与标准中规定限度有效数位一致，其数值小于或等于限度时判为符合规定，其数值大于限度时判为不符合规定。

符合限度者，判为符合规定。

5.4二氧化硫残留量  照《二氧化硫残留量测定法标准操作规程》（SOP-ZL-TY-015-01）检查。

5.4.1仪器装置  如图。A为1000ml两颈圆底烧瓶；B为竖式回流冷凝管；C为（带刻度）分液漏斗；D为连接氮气流入口；E为二氧化硫气体导出口。另配磁力搅拌器及电热套。

5.4.2测定法  取药材或饮片细粉约10g(如二氧化硫残留量较高可适当减少取样量，但不少于5g)，精密称定，置两颈圆底烧瓶中，加水300～400ml打开回流冷凝管开关给水，将冷凝管的上端E口处连接一橡胶导气管置于100mL锥形瓶底部。锥形瓶内加水3%过氧化氢溶液500mL为吸收液（橡胶导气管的末端应在吸收液面以下）。使用前，在吸收液中加入3滴甲基红乙醇溶液指示剂（2.5mg/mL），并用0.01mol/L氢氧化钠滴定液滴定至黄色（即终点；如果超过终点，则应舍弃该吸收溶液）。开通氮气，使流量计调节气体流量至约0.2L/min；打开带刻度分液漏斗C的活塞，使盐酸溶液（6mol/L）10ml流入蒸馏瓶中。立即加热两劲烧瓶内溶液加热至沸，并保持微沸，烧瓶内的水沸腾1.5小时后，停止加热。吸收液放冷后，置于磁力搅拌器上不断搅拌，用氢氧化钠滴定液（0.01mol/L）滴定，至黄色持续时间20秒不褪，并将滴定的结果用空白实验校正。 

5.4.3记录与计算

5.4.3.1记录：记录供试品的重量，供试品与空白消耗氢氧化钠滴定液的体积。

5.4.3.2计算公式：

        供试品中二氧化硫残留量（µg/g）

式中  A为供试品溶液消耗氢氧化钠滴定液的体积，ML；

      B为空白消耗氢氧化钠滴定液的体积，ML；

      C为氢氧化钠滴定液摩尔浓度，mol/L；

      0.032为1mL氢氧化钠滴定液（1mol/L）相当的二氧化硫的质量，g；

      W为供试品的重量，g

5.4.4结果判定

5.4.4.1技术指标：应不得过150mg/kg。

5.4.4.2结果判定：计算结果，按有效数字修约规则修约，使与标准中规定限度有效数位一致，其数值小于或等于限度时判为符合规定，其数值大于限度时判为不符合规定。

5.5含量测定

5.5.1挥发油：照《挥发油测定法标准操作规程》（SOP-ZL-TY-027-01）测定。

5.5.1.1仪器与用具：挥发油测定装置见下图：

A为1000ml（或500ml、2000ml）的硬质圆底烧瓶，上接挥发油测定器B，B的上端连接回流冷凝管C。以上各部均用玻璃磨口连接。测定器B应具有0.1ml的刻度。全部仪器应充分洗净，并检查接合部分是否严密，以防挥发油逸出。

5.5.1.2试药与试液：

二甲苯：分析纯。

5.5.1.3测定方法：

取水约300ml与玻璃珠数粒，置烧瓶中，连接挥发油测定器。自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，再用移液管加入二甲苯1ml，然后连接回流冷凝管。将烧瓶内容物加热至沸腾，并继续蒸馏，其速度以保持冷凝管的中部呈冷却状态为度，30分钟后，停止加热，放置15分钟以上，读取二甲苯的容积，取本品20g取本品除去杂质，称定重量（准确至0.01g），切成1〜2mm的小块，置烧瓶中，加水300ml，与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热至沸，并保持微沸约5小时，至测定器中油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm处为止。放置1小时以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度。依法测定，自油层量中减去二甲苯量，即为挥发油量，再计算供试品中挥发油的含量（%）。

5.5.1.4记录与计算

5.5.1.4.1记录 供试品的重量，读取二甲苯的体积，挥发油的读数。

5.5.1.4.2计算公式：

5.5.1.5结果判定

5.5.1.5.1技术指标：本品含挥发油不得少于0.13%(ml/g)。

5.5.1.5.2结果判定：计算结果，按有效数字修约规则修约，使与标准中规定限度有效数位一致，其数值大于或等于限度时判为符合规定，其数值小于限度时判为不符合规定。

5.5.2  6-姜辣素、8-姜酚、10-姜酚：照《高效液相色谱法检验标准操作规程》（SOP-ZL-TY-009-01）测定。

5.5.2.1仪器与用具：

5.5.2.1.1高效液相色谱仪，蒸发管散射检测器。

5.5.2.1.2 超纯水机。

5.5.2.1.3超声波清洗器。

5.5.2.1.4加热回流装置。

5.5.2.1.5电炉或电热套、水浴锅（可调温）。

5.5.2.1.6药典筛：二号筛。

5.5.2.1.7具塞锥形瓶，移液管， 容量瓶等。

5.5.2.2试药与试液：

5.5.2.2.1甲醇：色谱纯；

5.5.2.2.2 三氯甲烷：分析纯；

5.5.2.2.3 正丁醇：分析纯。

5.5.2.2.4 试验用水：超纯水。

5.5.2.2.5对照品：桔梗皂苷D对照品。

5.5.2.3操作方法

5.5.2.3.1对照品溶液的制备：取6-姜辣素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.05mg的溶液，即得。

5.5.2.3.2供试品溶液的制备：取本品切成1〜2mm的小块，取约lg ,精密称定，置lOOml圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

5.5.2.3.3色谱条件与系统适用性试验：

5.5.2.3.3.1色谱条件：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂以乙腈为流动相A，0 .1%甲酸溶液为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱;流速为每分钟0.5ml，检测波长为282nm。

5.5.2.3.3.2系统适用性试验：

精密吸取对照品溶液8ul，注人液相色谱仪，测定，理论板数按6-姜辣素峰计算应不低于5000；连续进样5次，主成分峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%。

5.5.2.3.4测定：

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。

供试品色谱中，8-姜酚和10-姜酚色谱峰与6-姜辣素对照品相应色谱峰的相对保留时间应在规定值的±5%范围之内。相对保留时间及校正因子见下表：

供试品测定应做两份，测定结果相对偏差应不超过 2.0 %。

5.5.2.4记录与计算

5.5.2.4.1记录色谱条件，供试品与对照品的名称、批号、含量及取用量，供试品与对照品的稀释倍数，系统适用性试验和含量测定的色谱图数据等。

5.5.2.4.2计算公式：

式中：  X为供试品中以干燥品计，6-姜辣素(C17H26O4)的含量，单位为%；

        AX为供试液的峰面积；

        AR为对照液的峰面积；

        CR为对照液的浓度，单位为ug/ml；

        P为对照品纯度，单位为%；

        V为供试品稀释倍数，单位为ml；

        M为供试品称样量，单位为g；

        B为样品的水分含量，单位为%；

5.5.2.5结果判定

5.5.2.5.1技术指标：本品含6-姜辣素（C17 H26O4)不得少于0.052%，8-姜酚(C19H3004)与10-姜酚（C21 H34O4)总量不得少于0.041%。

5.5.2.5.2结果判定：计算结果，按有效数字修约规则修约，使与标准中规定限度有效数位一致，其数值大于或等于限度时判为符合规定，其数值小于限度时判为不符合规定。

6、变更历史及原因