薄层层析法在生物化学实验中的改进

收稿日期:2004-10-15

作者简介:陈义文(1962-),副教授,博士,重庆人,从事有机合成的研究。基金项目:重庆邮电学院青年科技基金(A2002-18)

薄层层析法在生物化学实验中的改进

陈义文,谢永芳,梁亦龙,袁　帅,舒坤贤

(重庆邮电学院生物信息学院,400065)

摘　要:对脂类的薄层层析进行改进,用碘蒸气显色代替磷钼酸显色,脂类层析时间、斑点展开距离及显色结果令人满意。

改进后的显色方法简便、快速、效果好,便于学生实验操作。关键词:脂类;层析法;显色剂中图分类号:G 424・31文献标识码:C 文章编号:1008-9632(2005)02-0061-01

　　薄层层析是快速分离鉴定化合物的一种常用方法,因其设备简单易行并且分辨率较高,常被用于植物化学成分与中草药成分的鉴定[1]。显色方法对薄层层析的结果至关重要,本文对脂类薄层层析的显色方法加以改进,此法便于学生控制掌握,节约药品和清洁环境,结果令人满意,更适应于生物化学实验的教学。1　材料111　仪器　硅胶G 板(10cm ×5cm ,青岛海洋化工厂)层析缸、毛细管、电吹风、塑料米尺、恒温干燥箱。112　试剂　实验动物血清,石油醚(沸点在60～90℃之间),乙酸乙酯,氯仿,胆固醇,乙醇,NaCl ,氯仿-甲醇混合液,显色剂(磷钼酸5g 溶于70m L 蒸馏水及95%

乙醇25m L 中,再加70%过氯酸5m L ,混匀,常温储存。

)所有试剂均用分析纯。2　方法211　层析板的制备　称取硅胶G 1.5g 置研钵中,加入蒸馏水5m L ,研匀后迅速倾注在干燥洁净的(10cm ×5cm )的玻片上,水平放置,轻轻晃动玻片使硅胶分布均匀,待其凝固后.置105℃烘箱中烘35分钟活化备用。212　血清中脂类的提取　取新鲜血清0.1m L 置eppdorf 管中。加入1∶1氯仿∶甲醇混合液2m L ,不断颠倒振摇提取,30分钟后加入0.1m L/lNaC L0.4m L 混匀,离心(2000r/min )5分钟,取氯仿相。置另一离心管内,水浴蒸干后,加入0.1m L 氯仿,使其充分溶解.即为待测样品。213　标准液的配制　将油酸甘油三酯、胆固醇溶于氯仿,配制成1mg/m L 。214　点样与层析21411　点样　在距层析板一端2cm 距边缘约1.5cm 处

加样,分别用毛细管吸取标准及待测样品10μL 点样。各

点之间的间距约为1cm 记录各样品的排列(点样)位置。21412　层析　石油醚、乙酸乙酯、氯仿按体积比例为10∶1.5∶1作展开剂。取展开剂20m L 放入层析缸中,液层厚度约0.5cm 将点完样的层析板放入缸中。硅胶面

向上,并且略微垫高层析缸,勿使展开剂接触层析板点样端,盖上层析缸盖,静置14小时左右,待展开剂前沿蒸气达到饱和后,缓慢轻轻地放平层析缸.使点样端接触展开剂。开始层析分离。待展开剂前沿上升至距顶端0.5～1cm 处时取出层析板,停止展层,划下展开剂的前沿,空气中晾干。215　显色21511　改进方法　于碘缸中放置3min ,用碘蒸气显色确定样品的色带位置,计算R f 值(R f =原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离)。2.5.2　常用方法　喉头喷雾器向薄层板上均匀喷洒磷钼酸显色剂。置烘箱中105℃烘烤2～3分钟即可显色。显色时注意安全,喷均匀。显色时烘烤时间不宜过长,适当掌握[2]。结果见图1。左图为磷钼酸显色,右图为碘

蒸气显色。

11血清,21胆固醇,31甘油酸脂

图1　显色结果比较

3　讨论

由于碘能溶于脂类物质,用碘蒸气显色定位,则快

速,简便易行,便于操作。而且分离脂类物质后,如果还需进行进一步的鉴定,用此法显色将能满足此要求。我们可以用铅笔画出色带,待碘褪去后,再刮下色带的

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收稿日期:2004-8-15

文章编号:1008-9632(2005)02-0062-01

关于临时装片制作的几点改进

汪本圣

(安徽省肥西县肥光中学,231200)

　　制作洋葱表皮细胞临时装片是初中生物学的一个重要实验,也是第一个练习使用显微镜的实验,本实验成功与否直接关系学生学习生物学的兴趣和进行生物实验的积极性。因而教学中保证实验的顺利完成是非常重要的,本文笔者根据几年来的教学体会提出几点改进意见与同行们探讨。1　关于载玻片、盖玻片擦拭方法的改进

将载玻片和盖玻片擦拭干净是做好本实验的第一步。课本绘图示意了擦试方法,但实验中学生按图操作往往把载玻片、盖玻片弄破,对此我要求学生用右手大拇指与其余四指拿住纱布从两面包裹载破片(盖玻片)然后手指之间轻轻滑动、揉擦,使之干净,最后轻轻吹去尘纱,这样操作,弄破载破片(盖玻片)的情况少多了。2　关于洋葱鳞叶内表皮撕取方法的改进

　　撕取洋葱鳞片叶内表皮是本实验的关键步骤,实

验中不少同学撕下的内表皮卷成筒状,放到载玻片水滴中往往发生折叠很难展开,对此,我要求学生将鳞片叶放到培养器内,在水中撕取内表皮,这样撕下的内表皮就不会卷成筒状了,放到载玻片的水滴中轻易就展平了。3　关于盖盖玻片方法的改进

初做本实验的同学常遇到的困难就是盖盖破片时易出现气泡,影响细胞结构的观察,对此我要求学生先将盖玻片放到培养皿内在水中充分浸润(水对玻璃是浸润的)然后用扁头镊子夹起盖玻片的整个一边(以免夹破盖玻片)倾斜45°左右,使另一边先接触载玻片中水滴并先推后拉使水滴散开(以免盖上盖玻片后将盖玻片浮起)最后轻轻、缓缓地盖上,事实证明这样操作产生气泡的情况少多了。

吸附剂,作进一步鉴定。而用常规的磷钼酸显色剂显色,时间长,操作繁琐,而且学生不容易掌握,喷洒常常不均匀,易污染衣物、手与实验台。改用了碘缸显色,不存在上述缺点,步骤简单,快速,重现性好,减少了设备,节约药品。方法可靠,可以推广。

参考文献:

[1]李建武,萧能赓,余瑞元.生物化学实验原理和方法[M].北京:北京大学出版社,1994,19～82.

[2]黄如彬,丁昌玉,林厚怡,生物化学实验[M],北京:世界图书出版社,1995,42.

Thin layer chrom atography analysis improvement in biochemisty experiment

CHENY i -wei ,LIANGY i -long ,XIE Y ong -fang ,Y UANShuai ,SHUK un -xian

(Department of bioin formation ,Chongqing university of post and telegram ,Chongqing 40065,China )

Abstract :T o im prove chromatography analysis of lipds.We sprayed iodine gas instead of m olybdophosphoric acid.The

results were satis factory and the method is sim ple and fast.

K ey w ords :lipid ;chromatograyn ;spray reagent

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