硫酸苯酚法测可溶性总糖含量

一、测定原理

可溶性糖主要有能溶于水及乙醇的可溶性单糖和寡聚糖。糖在浓硫酸作用下脱水生成糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚所合成一种橙红色化合物，在10~100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，因此可用比色法在此波长下测定。硫酸苯酚法可以用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高且不受蛋白质存在的影响，产生的颜色稳定时间160min以上。

二、实验试剂

1．90%苯酚溶液：称取90g苯酚，加蒸馏水定容至100ml。

2．9%苯酚溶液：取3ml 90%苯酚溶液，加蒸馏水至30ml，现配先用。

3．浓硫酸（比重1.84）

4．1%蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在 80 ℃下烘至恒重，精确称取 1.000 g ，加少量水溶解，移入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。

5．100μg/L 蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液lml加入 100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。

三、仪器设备

分光光度计，50ml比色管7支，移液管

四、实验步骤

1．标准曲线的制作

取20 ml刻度试管6支，从0～5分别编号，按表1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1ml 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5～20 s 时间加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml，在室温下放置30 min ，显色。然后以空白为参比，在485 nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。

表一

3．测定 吸取0.5ml样品液于试管中（重复2次），加蒸馏水1.5 ml，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定光密度。由标准线性方程求出糖的量，计算测试样品中糖含量。 

四、结果计算     

可溶性糖含量（％）X = ﹙C×D／M﹚×100

X———每百克样品总糖含量

C———在标准曲线上查得的糖含量（g）

D———稀释倍数

M———样品重量(g)