邻二氮菲分光光度法测定微量铁实验报告

2009级医学检验        3组          吴茳铃       2009221885

实验目的和要求

1、掌握紫外可见分光光度计的基本操作；

2、掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理和方法；

3、掌握吸收曲线绘制及最大吸收波长选择；

4、掌握标准曲线绘制及应用。

实验原理

邻二氮菲（1,10—邻二氮杂菲）是一种有机配位剂，可与Fe2+形成红色配位离子

在pH=3~9范围内，该反应能够迅速完成，生成的红色配位离子在510nm波长附近有一吸收峰，摩尔吸收系数为1.1×104，反应十分灵敏，Fe2+ 浓度与吸光度符合光吸收定律，适合于微量铁的测定。

实验中，采用pH=4.5-5的缓冲溶液保持标准系列溶液及样品溶液的酸度；采用盐酸羟胺还原标准储备液及样品溶液中的Fe3+并防止测定过程中Fe2+被空气氧化。

实验仪器与试剂

1. 752S型分光光度计      2. 标准铁储备溶液（1.00×10-3mol/L）    3. 邻二氮菲溶液（0.15%，新鲜配制）      4. 盐酸羟胺溶液（10%，新鲜配制）       5. NaAC缓冲溶液

6. 50ml容量瓶7个        8.1cm玻璃比色皿2个                   9. 铁样品溶液

实验步骤

1、标准系列溶液及样品溶液配制，按照下表配制铁标准系列溶液及样品溶液。

   用1cm比色皿，以1号溶液作为参比溶液，测定4号溶液在各个波长处的吸光度，绘制吸收曲线，并找出最大吸收波长。

选择的最大吸收波长为：λmax = 510nm

3、标准曲线制作

在选定最大吸收波长处，用1cm比色皿，以1号溶液作为参比溶液，分别测定2至7号溶液的吸光度，平行测定3次，计算吸光度平均值，绘制标准曲线。

实验数据处理

1、样品中铁的计算

Cx=C读取值×50.00/2.50=0.05×20=1×10-3(mol/L)

2、摩尔吸光系数计算

在标准曲线的直线部分选择量两点，读取对应的坐标值，计算邻二氮菲配位物在最大吸收波长出的摩尔吸光系数：

ε=(A2－A1)/(c2－c1)=(0.461—0.233)/(0.04×10-3—0.02×10-3)=1.14×104L/(mol·cm)               

实验讨论

1、查资料红色配位物的摩尔吸光系数与实验计算一致，影响成败的关键可能有：标准液和样品液的配置不准、分光光度计使用不当。

2、比色皿在换装不同浓度的溶液时，必须用待测的溶液润洗至少三次。

3、注意分光光度计的正确操作。

4、PH值影响配位物的解离程度，故缓冲液要适量。

5、比色皿放入分光光度计样品室钱，必须用吸收纸将表面擦拭干净。

                                                           指导老师：颜玉蓉                                               时间：2011  年10月