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Bradford法测蛋白浓度

来源：动视网责编：小OO 时间：2025-09-23 21:12:46

Bradford法测蛋白浓度

Bradford法测蛋白浓度一、考马斯亮蓝试剂考马斯亮蓝G─25020mg溶于9.5mL乙醇中，加入17mL磷酸和173.5ml蒸馏水。二、标准和待测蛋白质溶液1．标准蛋白质溶液IFN-r紫外扫描定量，用0.15mol/LNaCl配制成1OD280/mL蛋白溶液。2．待测蛋白质溶液。DH5a菌体蛋白和XL－Blue菌体蛋白，使用前用0.15mol/LNaCl稀释。三、器材DU800四、操作方法1.制作标准曲线取7支离心管，按下表平行操作。试管编号0123456标准蛋白溶液（mL）00.010.

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导读Bradford法测蛋白浓度一、考马斯亮蓝试剂考马斯亮蓝G─25020mg溶于9.5mL乙醇中，加入17mL磷酸和173.5ml蒸馏水。二、标准和待测蛋白质溶液1．标准蛋白质溶液IFN-r紫外扫描定量，用0.15mol/LNaCl配制成1OD280/mL蛋白溶液。2．待测蛋白质溶液。DH5a菌体蛋白和XL－Blue菌体蛋白，使用前用0.15mol/LNaCl稀释。三、器材DU800四、操作方法1.制作标准曲线取7支离心管，按下表平行操作。试管编号0123456标准蛋白溶液（mL）00.010.

Bradford法测蛋白浓度

一、考马斯亮蓝试剂

考马斯亮蓝G─250 20mg溶于9.5mL乙醇中，加入17mL 磷酸和173.5ml蒸馏水。

二、标准和待测蛋白质溶液

1．标准蛋白质溶液

IFN-r紫外扫描定量，用0.15mol/L NaCl配制成1OD280/mL蛋白溶液。

2．待测蛋白质溶液。

DH5a 菌体蛋白和XL－Blue菌体蛋白，使用前用0.15mol/L NaCl稀释。

三、器材

DU800

四、操作方法

1.制作标准曲线

取7支离心管，按下表平行操作。

试管编号	0	1	2	3	4	5	6
标准蛋白溶液（mL）	0	0.01	0.02	0.03	0.04	0.05	0.06
0.15mol/L NaCl（mL）	0.1	0.09	0.08	0.07	0.06	0.05	0.04
考马斯亮蓝试剂（mL）	5mL
摇匀，1h内以0号管为空白对照，在595nm处比色
A595nm

测定结果如下：

蛋白量（ug）	580nm 1	580nm 2	580nm平均	595nm 1	595nm 2	595nm平均
10	0.0814	0.0755	0.07845	0.0709	0.0671	0.069
20	0.2335	0.2288	0.23115	0.2144	0.2188	0.2166
30	0.32	0.285	0.3025	0.307	0.2661	0.28655
40	0.372	0.3	0.3805	0.3537	0.372	0.36285
50	0.443	0.4927	0.46785	0.4196	0.4751	0.44735
60	0.08	0.528	0.5844	0.6224	0.5079	0.56515

实验过程中发现，蛋白与G-250混合后，吸收值不稳定，随时间变化。

2.扫描测试实验

1）加20ug IFN-r，混合后扫描595nm吸收变化值，参比：450nm，时间：0——50min，测1次/min ，结果：吸收值随时间逐渐下降，图谱名称:20110321 20ug

2）加60ug IFN-r，混合后扫描595nm吸收变化值，参比：450nm，时间：0——50min，测1次/min，结果：吸收值随时间逐渐下降，10——20min时变化幅度较小，图谱名称:20110321 60ug

3）加40ug IFN-r扫描，混合后400——700nm波长扫描，分别在1、2、3、4、5、10、15、20、25、30min时扫描，595nm吸收值随时间逐渐下降，450nm吸收值变化很小，变化值约0.001。图谱名称：20110322－1

4）加40ug IFN-r，混合后扫描595nm吸收变化值，参比：450nm，时间：0——50min，测1次/min，结果：吸收值随时间逐渐下降，10——20min时变化幅度较小，图谱名称:20110321 60ug

20min时吸收值：0.3855

样品重新吹打混合后扫描：0.37 0.3784 0.3734

可能是复合物发生沉淀，重新吹打后扫描值又上升。

5）加入0.1%SDS，抑制复合物的聚集，结果发现：加入蛋白后，G－250试剂颜色不变，扫描无吸收值，可能SDS在抑制复合物的聚集的同时，也抑制了蛋白与G－250的结合。

按仪器组方法检测蛋白浓度

一、试剂

母液：考马斯亮蓝G─250 100mg溶于50mL 95%乙醇中，加入100mL 85%磷酸。

工作液：用前按母液：水＝15：85的比例稀释

二、标准蛋白

BSA：用水将BSA稀释为0.1mg/ml

检测蛋白稀释到0.01——0.05ug/ul的浓度范围内测定

三、测定

1.标准曲线

编号	0	1	2	3	4	5
0.1mg/mlBSA（ul）	0	20	40	60	80	100
水（ul）	200	180	160	140	120	100
工作液（ml）	1	1	1	1	1	1

读数前加入工作液，迅速混匀后立即读数。

用DU800 protien analysis 分析，波长595nm

标准曲线测定结果：

将蛋白稀释后测定结果：

样品	DH5a	XL-BLUE	细胞破碎	细胞上清1	细胞上清2
稀释倍数	80	80	200	100	20
测定值（ug/ul）	0.0198	0.0142	0.0291	0.0199	0.0284
结果（ug/ul）	1.58	1.136	5.82	1.99	0.568

Bradford法测蛋白浓度

Bradford法测蛋白浓度一、考马斯亮蓝试剂考马斯亮蓝G─25020mg溶于9.5mL乙醇中，加入17mL磷酸和173.5ml蒸馏水。二、标准和待测蛋白质溶液1．标准蛋白质溶液IFN-r紫外扫描定量，用0.15mol/LNaCl配制成1OD280/mL蛋白溶液。2．待测蛋白质溶液。DH5a菌体蛋白和XL－Blue菌体蛋白，使用前用0.15mol/LNaCl稀释。三、器材DU800四、操作方法1.制作标准曲线取7支离心管，按下表平行操作。试管编号0123456标准蛋白溶液（mL）00.010.

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