细胞划痕实验

一、实验原理

细胞划痕（wound healing）法是简捷测定细胞迁移运动和修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量头或其它硬物在细胞生长的区域划线，去除部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间，取出细胞培养板，观察周边细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别，通过不同分组之间的细胞对于划痕区修复能力的不同，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。

二、实验步骤

1、 所有要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min。

2、 1）先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，大约每隔0.5-1cm一道，横穿过孔，每孔至少穿过5条线。

2）在空中加入约5×105个细胞（具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满），37℃培养箱培养。

3）第二天用10µl头比着直尺，与标记线垂直的方向划两条平行线，头要垂直，不能倾斜。

4）用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基。

5）放入37℃ 5% CO2培养箱，按0、6、12、24h倒置显微镜观察，拍照。

三、注意事项

1、在用PBS缓冲液冲洗时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。

2、一般做划痕实验，都是无血清或者低血清（<2%），否则细胞增殖就不能忽略。（也可用丝裂酶处理一小时）

3、按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，以解决了前后观察时位置不固定的问题。