三氯乙酸(TCA)沉淀蛋白的原理

TCA 与蛋白质之间主要有以下几个方面的作用: 

① 在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐. ② 作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变, 暴露出较多的疏水性基团, 使之聚集沉淀. ③ 随着蛋白质分子量的增大, 其结构复杂性与致密性越大, TCA 可能渗入分子内部而使之较难被完全除去, 在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片, 而且随时间的 延长这一作用愈加明显. ④ 电泳图谱显示,BSA , HSA 单体谱带有较明显的展宽现象, 这可能是由于TCA 的结合, 使SDS 与蛋白质的结合量产生偏差, 从而造成蛋白质所带电荷的不均一性, 造成迁移率的不一致.我们认为在电泳时使用TCA 对蛋白质样品的浓缩或除盐时, 对于分子质量大的蛋白质, 要慎重选择TCA. 对小分子量蛋白质的浓缩, 采用TCA 时也有两点需要注意: 一是用TCA 沉淀后, 尽量用丙酮彻底抽提TCA; 二是样品处理后要尽快进行电泳分析, 以免发生聚集及断裂, 造成结果分析的不准确.