使用LI-COR 00测量光合步骤及注意事项

1、光合测定过程

1. 正确连接IRGA，缓冲瓶（利用大气二氧化碳，将缓冲瓶放置离人较远并悬挂2-3m处）。接上电池(电源)，开机。

2. 安装红蓝（LED）光源。选Config Menu（F2），选Light Source  Control项，选取Pick Source，选取人工光Lightsource = 00 - 02B，按F5“ Done” 进入“Config Menu ”第一项“Config Status”, 选择F3“Save As”,给一个文件名e.g:“LED Red Blue Light Source”进入“ Config Menu ”最后一项“ Reset Menu ”，选取“Reset to User Configuration”,确认选择“LED Red Blue Light Source”，这样，光源就安装成功了。以后，不必再安装光源了。如果这一步已经安装好可以省去直接开机。 

3. 根据叶室（一般选择2×3 LED),按Enter，选择Y。

4. 当显示：“Is the IRGA connected?(Y/N)”选择“Y”。预热二十分钟以上。

5. 调零：调零前确保叶室紧闭，（即上下叶室刚刚接触到，再张开叶室，调紧螺丝半圈）。

选“Calib  Menu”（校准菜单即F3）项：

① 选“Flow Meter Zero”项（流量计调零），按Enter，10 秒后读数稳定，视具体情况，用f1、f2 调节，至读数基本稳定，且在±1mv 范围内，F5 退出； 

② 选择红外分析仪调零“IRGA Zero”：此时要求旋紧碱石灰管和干燥管上端的调节螺母指向Full SCRUB方向，即全虑除状态清空并关闭叶室，按Enter，按Y，按press any key，等待数数分钟，看屏幕确定。待CO2_R 及 CO2_S 波动范围都小于±0.1时可以按Auto_CO2；待H2O_R 及H2O_S 波动范围都小于±0.01时，可以按Auto_H2O。或者在以上条件都满足时，按Auto_All。按F5 (Quit)退出，进入“View, Store Zero_Span”,按F1 “Store”,保存本次校准数据。

6. 设置光源：进入主界面按New Msmnts（测量菜单即F4），按2（进入第二功能行），PAR（F5），选择Q，输入光强（以外界光强为基准）。然后按escape 进入主界面。

7. 开始测量：按New Msmnts（F4）项，打开碱石灰管和干燥管上的螺母至全旁路(ByPass)位置（以前已经打开的话，此时只需要再检查一下）： 

①“Match” 如果∆CO2 >0.5 (通常，正常值可以< 0.3)，则需要匹配(level 1 F5“Match”) CO2 读数为环境大气浓度380 左右, H2O 读数为10-20 左右（视具体天气情况而定），待读数稳定且样品室和参考室的数值稳定时，选取label 1 F5“Match”；待数值稳定，且两室的数值之差在0.5 以内。 

② 选“Open  Logfile”（F1）项，在file：Date 后输入文件名和标记进行命名（一般是时间+试验样地+名字，这个可根据个人爱好设定，只要不与其他同学重复就行），按Enter，进入Enter/Edit Remark 标样地，按Enter，开始测量。

打开叶室，夹入样品，进行测定。等待数据稳定, 按C 行Photo：数值稳定在小数点后一位或者E行 Stable 1 时稳定。按Log（F1）测一个数据， 更换另一叶片，按 f4，添加 remark,重复以上步骤，进行测量。至少半小时进行一次 Match。 

测量完毕，按 F3 “Close”关闭文件，“escape”，进入主菜单。

8. 关机。按 esc，退回主界面，按welcome menu (F1),选择Quite open，选IRGAS OFF，关闭电源。

9. 关机后将化学管旋钮旋至中间松弛状态；旋转叶室固定螺丝，保持叶室处于打开状态。  

二．测光响应曲线：

1. 开机，配置界面选择红蓝光源，连接状态按“Y”，进入主菜单，预热约20分钟。 调零等操作与测光合作用一致，参考前页。

2．按 New Msmnts（F4 )进入测量菜单。如果将使用二氧化碳钢瓶控制浓度的话，按 2，再按F3(CO2 Mixer)，按上下箭头键选择 R) Ref CO2 XXX μmol mol-1，按Enter，设定CO2浓度为环境CO2浓度(约 400 μmol mol-1)，按Enter。（此步骤可选择） 

3. 按 1,F1, Open Log File,建立一个文件，按Enter，输入一个 remark，按Enter。打开叶室，夹好叶片，闭合叶室。

4. 按 5，F1(Auto prog)，进入自动测量界面，按上下箭头键选择 LightCurve(光响应曲线，A-cicurve是CO2响应曲线)，按Enter 进入，按Y，出现 Desired lamp settings，自高到低设定光强梯度如：1500 1200 1000 800 600 400 200 150 100 50 20 0(注意数值间一定空格间隔，为保障测量准确，后面的间隔要小一些，上面数值仅供参考)，按Enter ，出现 Minimum wait time (secs): 设定 60，按Enter，出现Maximum wait time(secs):设定 200，按Enter，出现 Match if |ΔCO2| less than (ppm):设定 20 或 15，按Enter，按 Y，进入自动测量，等待测量结束。 更换叶片，重复以上步骤。 待全部测量完毕后，按 1，F3 (Close file)保存文件。 

5. 关机。按 esc，退回主界面，按welcome menu (F1),选择Quite open，选IRGAS OFF，关闭电源。 把化学管旋钮旋至中间松弛状态；旋转叶室固定螺丝，保持叶室处于打开状态。 

三、注意事项

1.1 测定之前的注意事项

1. 为了省电，测定开始后要将LI-COR 00主机的背光关掉（ctrl+shift+home）。

2. 在测定过程中，主机屏幕要遮起来（手套、笔记本等），以免太阳直射，造成老化，影响观察数据。

3. 叶片生长环境一致，且能代表满足实验目的需要的叶片生长微环境。主要针对光环境。

4. 叶龄一致。避免使用衰老和不成熟叶片。 

5. 叶片之间无相互遮荫的叶片。 

6. 选择生长状况良好叶片，包括无病虫害、无损伤、水份和营养状况良好。 

7. 测定过程中尽量保持叶片原来状态，包括位置，角度等等。 

8. 最适测量时间为上午9:00 — 11:00，即双峰植株第一个光合状况最佳时间，如果是单峰植株，则可以适当延长测定时间。 

9. 同一天测定光响应和CO2响应曲线时，尽量使用不同叶片。这两个叶片要求叶龄、生长状况、生长环境尽可能的一致。

1.2 仪器注意事项 

1. 一旦三分之二干燥剂颜色发红需要立即更换； 

2. 使用CO2 钢瓶时，必须先调零再装钢瓶； 

3. 注意仪器保养，轻拿轻放，信号线尽量保持伸展，勿扭曲，否则易使接口不牢，线头从接口处滑出； 

4. 关于缓冲瓶：应使用无色透明容器，且体积以不小于二升为佳，出气口与进气口要尽可能的远。 

四．常见故障及处理： 

1. 休眠后CO2 浓度无法控制，这是使用CO2 钢瓶引起的，故用钢瓶时预热稍长，干燥剂需要换可直接拆卸，迅速换好安装回去； 

2. match 时显示“IRGA not ready”，此时需检查探头各处是否接牢，如果不是接线的问题，可能故障与1相似； 

3. CO2 calibration 不能达到50 以下，需检查空气进口是否封闭严实，另外就是滤嘴是否需要更换。 

4. 使用CO2 钢瓶时，最小CO2R 在50ppm. 

注：仪器更新换代比较快，操作过程中有些选择项会有差异，请大家视情况而定。