样品编号：
检验日期： 年 月 日
| 检验项目 | 蛋白质 | 检验方法 | GB 5009.5-2016第一法 | |||||||
| 检验仪器 | 仪器名称 | 仪器编号 | 量值溯源状态 | |||||||
| 电子天平 | ||||||||||
| 酸式滴定管 | ||||||||||
| 试剂配制 | 硼酸溶液(20g/L):称取20g硼酸,加水溶解后并稀释至1000mL。氢氧化钠溶液(400g/L):称取40g氢氧化钠加水溶解后,放冷,并稀释至100mL。 硫酸标准滴定溶液[c(12H2SO4)]0.0500mol/L或盐酸标准滴定溶液[c(HCl)]0.0500mol/L。 甲基红乙醇溶液(1g/L):称取0.1g甲基红,溶于95%乙醇,用95%乙醇稀释至100mL。 亚甲基蓝乙醇溶液(1g/L):称取0.1g亚甲基蓝,溶于95%乙醇,用95%乙醇稀释至100mL。 溴甲酚绿乙醇溶液(1g/L):称取0.1g溴甲酚绿,溶于95%乙醇,用95%乙醇稀释至100mL。 A 混合指示液:2份甲基红乙醇溶液与1份亚甲基蓝乙醇溶液临用时混合。 B混合指示液:1份甲基红乙醇溶液与5份溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。 | |||||||||
| 检验过程 （此处根据自己实验室情况选择一种，删去另外一种） | 凯氏定氮法 | 试样处理:称取充分混匀的固体试样 g（半固体试样 g或液体试样 g）(约当于30mg～40mg氮),精确至0.001g,移入干燥的定氮瓶中,加入0.4g硫酸铜、6g硫酸钾及20mL硫酸,轻摇后于瓶口放一小漏斗,将瓶以45℃角斜支于有小孔的石棉网上。小心加热,待内容物全部碳化,泡沫完全停止后,加强火力,并保持瓶内液体微沸,至液体呈蓝绿色并澄清透明后,再继续加热0.5h～1h。取下放冷,小心加入20mL水,放冷后,移入100mL容量瓶中,并用少量水洗定氮瓶,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀备用。同时做试剂空白试验。 测定:装好定氮蒸馏装置,向水蒸气发生器内装水至2/3处,加入数粒玻璃珠,加甲基红乙醇溶液数滴及数毫升硫酸,以保持水呈酸性,加热煮沸水蒸气发生器内的水并保持沸腾。 向接受瓶内加入10.0mL硼酸溶液及1滴～2滴A 混合指示剂或B混合指示剂,并使冷凝管的下端插入液面下,根据试样中氮含量,准确吸取2.0mL～10.0mL试样处理液由小玻杯注入反应室,以10mL水洗涤小玻杯并使之流入反应室内,随后塞紧棒状玻塞。将10.0mL氢氧化钠溶液倒入小玻杯,提起玻塞使其缓缓流入反应室,立即将玻塞盖紧,并水封。夹紧螺旋夹,开始蒸馏。蒸馏10min后移动蒸馏液接收瓶,液面离开冷凝管下端,再蒸馏1min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部,取下蒸馏液接收瓶。尽快以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定至终点,如用A 混合指示液,终点颜色为灰蓝色;如用B混合指示液,终点颜色为浅灰红色（此处依据具体所用指示剂，删掉另外一个）。同时做试剂空白。 | ||||||||
| 自动凯氏定氮法 | 称取充分混匀的固体试样 g（半固体试样 g或液体试样 g）(约当于30mg～40mg氮),精确至0.001g,至消化管中,再加入0.4g硫酸铜、6g硫酸钾及20mL硫酸于消化炉进行消化。当消化炉温度达到420℃之后,继续消化1h,此时消化管中的液体呈绿色透明状,取出冷却后加入50mL水,于自动凯氏定氮仪(使用前加入氢氧化钠溶液,盐酸或硫酸标准溶液以及含有混合指示剂A或B（此处依据具体所用指示剂，删掉另外一个）的硼酸溶液)上实现自动加液、蒸馏、滴定和记录滴定数据的过程。 | |||||||||
| 检验结果 | 样品质量 m（g） | 吸取消化液体积 V3（mL） | 试样消耗标液体积V1（mL） | 空白消耗标液体积V2（mL） | 氮换算为蛋白质的系数F | □1/2硫酸 （□盐酸） C（mol/L） | 样品含量 X（g/100g） | 平均值 （g/100g） | ||
| 计算公式 | X=( V1-V2)*C*0.0140*F*100/m/( V3/100) | |||||||||
| 其他说明 | 1.重复性条件下获得的两次测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10% 2.结果≥1g/100g时，保留三位有效数字；结果＜1g/100g时，保留两位有效数字 3.称样量为5g时，检出限为8mg/100g | |||||||||
样品编号：
检验日期： 年 月 日
| 检验项目 | 蛋白质 | 检验方法 | GB 5009.5-2016第二法 | |||||||||
| 检验仪器 | 仪器名称 | 仪器编号 | 量值溯源状态 | |||||||||
| 电子天平 | ||||||||||||
| 分光光度计 | ||||||||||||
| 试剂配制 | 氢氧化钠溶液(300g/L):称取30g氢氧化钠加水溶解后,放冷,并稀释至100mL。 对硝基苯酚指示剂溶液(1g/L):称取0.1g对硝基苯酚指示剂溶于20mL95%乙醇中,加水稀释至100mL。 乙酸溶液(1mol/L):量取5.8mL乙酸,加水稀释至100mL。 乙酸钠溶液(1mol/L):称取41g无水乙酸钠或68g乙酸钠,加水溶解稀释至500mL。 乙酸钠-乙酸缓冲溶液:量取60mL乙酸钠溶液与40mL乙酸溶液混合,该溶液pH4.8。 显色剂:15mL甲醛与7.8mL乙酰丙酮混合,加水稀释至100mL,剧烈振摇混匀(室温下放置稳定3d)。 氨氮标准储备溶液(以氮计)(1.0g/L):称取105℃干燥2h的硫酸铵0.4720g加水溶解后移于100mL容量瓶中,并稀释至刻度,混匀,此溶液每毫升相当于1.0mg氮。 氨氮标准使用溶液(0.1g/L):用移液管吸取10.00mL氨氮标准储备液于100mL容量瓶内,加水定容至刻度,混匀,此溶液每毫升相当于0.1mg氮。 | |||||||||||
| 检验过程 | 试样消解：称取充分混匀的固体试样 g（半固体试样 g或液体试样 g）(精确至0.001g),移入干燥的定氮瓶中,加入0.1g硫酸铜、1g硫酸钾及5mL硫酸,摇匀后于瓶口放一小漏斗,将定氮瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。缓慢加热,待内容物全部炭化,泡沫完全停止后,加强火力,并保持瓶内液体微沸,至液体呈蓝绿色澄清透明后,再继续加热0.5h。取下放冷,慢慢加入20mL水,放冷后移入50mL或100mL容量瓶中,并用少量水洗定氮瓶,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀备用，试样消化液定容体积为V1。按同一方法做试剂空白试验。 试样溶液的制备：吸取V2mL试样或试剂空白消化液于50mL（或100mL）容量瓶内,加1滴～2滴对硝 基苯酚指示剂溶液,摇匀后滴加氢氧化钠溶液中和至黄色,再滴加乙酸溶液至溶液无色,用水稀释至刻度,混匀试样溶液总体积为V3mL。 标准曲线的绘制：吸取0.00mL、0.05mL、0.10mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL 和1.00mL 氨氮标准使用溶液(相当于0.00μg、5.00μg、10.0μg、20.0μg、40.0μg、60.0μg、80.0μg和100.0μg氮),分别置于10mL比色管中。加4.0mL乙酸钠-乙酸缓冲溶液及4.0mL显色剂,加水稀释至刻度,混匀。置于100℃水浴中加热15min。取出用水冷却至室温后,移入1cm比色杯内,以零管为参比,于波长400nm处测量吸光度值,根据标准各点吸光度值绘制标准曲线或计算线性回归方程。 试样测定：吸取V4mL(约相当于氮<100μg)试样溶液和同量的试剂空白溶液,分别于10mL比色管中。加4.0mL乙酸钠-乙酸缓冲溶液及4.0mL显色剂,加水稀释至刻度,混匀。置于100℃水浴中加热15min。取出用水冷却至室温后,移入1cm比色杯内,以零管为参比,于波长400nm处测量吸光度值,试样吸光度值与标准曲线比较定量或代入线性回归方程求出含量。 | |||||||||||
| 检验结果 | 样品质量 m（g） | 试样消化液定容体积V1（mL） | 试样溶液总体积V3（mL） | 吸取消化液体积V2（mL） | 测试用试样溶液体积 V4（mL） | 试样测定液氮含量C（μg） | 试剂空白氮含量 C0（μg） | 氮换算为蛋白质的系数F | 样品含量X（g/100g） | 平均值（g/100g） | ||
| 计算公式 | X=( V1-V2)*C*0.0140*F*100/m/( V3/100) | |||||||||||
| 其他说明 | 1.重复性条件下获得的两次测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10% 2.蛋白质含量≥1g/100g时，保留三位有效数字；蛋白质含量＜1g/100g时，保留两位有效数字 3、称样量为5g时，检出限为0.1mg/100g | |||||||||||
样品编号：
检验日期： 年 月 日
| 检验项目 | 蛋白质 | 检验方法 | GB 5009.5-2016第三法 | |||
| 检验仪器 | 仪器名称 | 仪器编号 | 量值溯源状态 | |||
| 电子天平 | ||||||
| 氮/蛋白质分析仪 | ||||||
| 检验过程 | 按照仪器说明书要求称取 g充分混匀的试样(精确至0.0001g),用锡箔包裹后置于样品盘上。试样进入燃烧反应炉(900 ℃~1200 ℃)后,在高纯氧(≥99.99%)中充分燃烧。燃烧炉中的产物(NOx )被载气二氧化碳或氦气运送至还原炉(800℃)中,经还原生成氮气后检测其含量。 | |||||
| 检验结果 | 试样中氮含量C（g/100g） | 氮换算为蛋白质的系数F | 样品含量X（g/100g） | 平均值（g/100g） | ||
| 计算公式 | X=C*F | |||||
| 其他说明 | 1.重复性条件下获得的两次测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10% 2.结果保留三位有效数字 | |||||
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