酶学性质研究

   （1）pH的影响：分别测定粗酶液在pH3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0下的酶活力，确定其最适反应pH值；将粗酶液用上述pH缓冲液稀释后，45℃水浴保温4小时后，测定其剩余酶活力。

（2）温度的影响：分别在40~95℃下测定酶活力，确定其最适反应温度；将酶液在40～90℃范围内的不同温度下保温60 min后，测定其剩余酶活力。

（3）金属离子的影响：在酶液中分别添加各种金属离子，使其浓度为4 mmol／L，然后测定酶活力。

2.5 纤维素酶粗酶液酶学性质

2.5.1酶反应的最适pH值和酶的pH稳定性

粗酶液在不同pH值下测得的酶活及在不同pH值下处理4小时后测得的相对酶活示于图11。结果表明，CMCase在pH 3.5～4.5有较高的酶活力，最适反应pH值为4.0；β-Gluase在pH 4.5～5.5酶活力较高，最适反应pH值为5.0，同样方法测得FPA最适反应pH为5.0。可见，该菌株所产的各组分纤维素酶是酸性酶。

图11表明，该菌产CMCase在pH3.0～6.0的范围内，β-Gluase在pH3.5～5.5的范围内，酶活力均可保持在80％以上，说明该菌株所产酸性纤维素酶可在较宽的pH值范围内保持其酶活力的稳定性。2.5.2 酶反应的最适温度和酶的热稳定性

在不同温度下直接进行酶促反应测得的酶活及在不同温度下热处理60 min后于最适反应温度和最适pH下测得的相对酶活(以4℃保存的酶液活力为100%)示于图12。结果表明，CMCase、β-Gluase及FPA最适反应温度均为65℃。

2.5.3金属离子对酶活性的影响

考察了14种金属离子对酶活性的影响，以不添加金属离子的酶液酶活为100%计算相对酶活，结果见表1。结果表明，Fe2+、Mn2+对两种酶活有明显的激活作用，Mg2+对酶活有一定的激活作用，Hg2+、Cu2+和Ag+三种重金属离子对酶活有强烈的抑制作用，而所考察的其他金属离子在实验浓度范围内对酶活无明显影响。

表1 金属离子对酶活性的影响

Table 1 Effects of metal ion on cellulase activity

Metal