紫外光度法测定酪氨酸

一、实验目的

1、掌握紫外可见分光光度计的工作原理和操作方法；

2、用紫外可见分光光度计进行定性及定量分析。

二、实验原理

紫外可见分光光度计基本工作原理和红外光谱仪相似，利用一定频率的紫外－－可见光照射被分析的有机物质，引起分子中价电子的跃迁，它将有选择地被吸收。一组吸收随波长而变化的光谱，反映了试样的特征。在紫外可见光的范围内，对于一个特定的波长，吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因此测量光谱可以进行定性分析，而且根据吸收与已知浓度的标样的比较，还能进行定量分析。

三、应用范围

紫外可见分光光度分析在有机化学、无机化学、生物、医药、材料、冶金、地质等领域有广泛的应用。可以鉴定分子结构比较复杂的有机物质，测定微量物质的含量，研究物质的分子结构和反应的历程，立体结构的确定等。工业方面的专门用途包括水分析、食品和饮料分析、DNA和RNA分析、生命科学、分子生物相关的方法以及反射能力测量等。在药品研究中，可以定量分析留体、维生素、抗菌素、生物碱、黄酮类等。可进行时间扫描。

四、仪器和试剂

仪器：U-3010紫外可见分光光度计；比色管（10ml；25ml）；容量瓶（250ml；50ml）；移液管（10ml；5ml）；滴管；烧杯（500ml；50ml）；玻璃棒；试管架

试剂：（1）10-3 mol/L酪氨酸储备液：准确称取45.30mgL-酪氨酸,加50 ml二次水溶解，用二次水定容至250ml。

（2）二次水

五、实验步骤

1.系列标准溶液的配制  取5只10 ml比色管，用10-3 mol/L酪氨酸储备液配制浓度分别为10-4，2×10-4，3×10-4，4×10-4，6×10-4mol/L标准溶液。

    2.绘制标准曲线  用紫外可见分光光度计扫描待测酪氨酸溶液，找出酪氨酸的最大吸收峰。将波长固定在最大吸收峰处，测定系列标准溶液的吸光度。

    3.未知溶液的测定  在标准系列溶液同样条件下，测量未知溶液的吸光度。

六、数据处理

以吸光度为纵坐标，以酪氨酸溶液的浓度为横坐标作标准曲线。根据未知溶

液的吸光度可在标准曲线上确定未知液中酪氨酸的浓度。

附一：U-3010紫外可见分光光度计

一．仪器光路示意图

二．操作方法

1）系统开机准备

1.接通电源，启动微机

2.打开光谱仪主机电源

3.预热15分钟

2）操作步骤

1.运行UV Solution软件

2.设定检测方法和测量参数

3.输入样品名称、注释及操作者姓名

4.将空白样品分别放入参比池和样品池，校准用户基线

5.将样品放入样品池,开始测量

6.打开数据处理页面，进行数据处理

7.保存数据

8.检测下一个样品

3）系统关机清理

1.退出UV Solution软件

2.关闭光谱仪主机电源

3.关闭计算机

4.抽下电源插座，切断电源

5.作好仪器使用记录，清理实验台