磺基水杨酸法测铁学生用[1]

一、教学要求

1、掌握用磺基水杨酸显色法测定铁的原理和方法。

2、学会绘制标准曲线的方法。

3、掌握722型分光光度计的使用方法。

二、预习内容

1、了解722型分光光度计构造

2、掌握722型分光光度计使用方法及注意事项；

3、理解工作曲线的制作及意义；

三、实验原理

磺基水杨酸是分光光度法测定铁的有机显色剂之一。磺基水杨酸（简式为H3R）与Fe3+可以形成稳定的配合物，因溶液pH的不同，形成配合物的组成也不同。在 pH=9～11.5 的 NH3.H2O-NH4Cl 溶液中，Fe3+与磺基水杨酸反应生成三磺基水杨酸铁黄色配合物。

+  Fe3+   

该配合物很稳定, 试剂用量及溶液酸度略有改变都无影响。Ca2+、 Mg2+、 Al3+ 等与磺基水杨酸能生成无色配合物, 在显色剂过量时, 不干扰测定。F-、 NO3-、 PO43- 等离子对测定无影响。Cu2+ 、Co2+、Ni2+、Cr3+ 等离子大量存在时干扰测定。由于Fe2+ 在碱性溶液中易被氧化，所以。本法所测定的铁实际上是溶液中铁的总含量。

磺基水杨酸铁配合物在碱性溶液中的最大吸收波长为 420nm, 故在此波长下测量吸光度。

四、仪器、药品

仪器：722型分光光度计，50毫升比色管8支，吸量管（5毫升）4支.10毫升移液管1支。

药品：

1、铁标准储备液（100ｕg/ml）.准确称取0.8634克铁盐NH4Fe（SO4）2.12H2O，置于烧杯中，加入20毫升1+1的HCL和少量水，溶解后，转入1L容量瓶中，加水稀释至刻度，充分摇匀。

2、铁标准使用液（10ｕg/ml）.用移液管移取上述铁标准储备液10.00毫升，置于100毫升容量瓶中，加入2毫升1+1的HCl，加水稀释至刻度，充分摇匀。

3. 10%的NH4CL溶液

4. 10%的磺基水杨酸溶液

5. 1+1氨水溶液（滴瓶装）

五、实验内容及步骤

（一）进入实验室，将实验要用到的有关玻璃器皿按洗涤要求洗涤干净备用。

（二）722型分光光度计的使用。

1、波长调整：转动波长旋钮使波长移到所需之处。

2、开机预热30分钟

3、T零调整：按功能键 / 透射比模式 / 置入遮光体 / 合上样品盖 / 按0%T调零/取出遮光体。

4、A零调整：按功能键 / 吸光度模式 / 置入参比液 / 合上样品盖 / 按100%T调零。

5、样品测试：置入待测样品液 / 合上样品室盖 / 读数据

（三）试液中铁的测定

1、 工作曲线的绘制

在6 只 25ml 比色管中, 用吸量管分别加入0.00 、1.00、 2.00、3.00、4.00 、5.00

浓度为10ｕg/ml的铁标准使用液, 各加 4ml 10% NH4Cl溶液和2ml 10%磺基水杨酸溶液, 滴加1+1氨水直到溶液变黄色后, 再多加1ml, 加水稀释至刻度, 摇匀。用分光光度计于420m波长下, 以试剂空白作参比溶液, 调节透光度为100%, 测出各标准溶液的吸光度 。以吸光度为纵坐标, 铁含量为横坐标, 绘制工作曲线。

2、试液中铁含量的测定

用吸量管吸取待测试液 2.OOml于 25ml比色管中（两份）, 在与标准溶液相同条件, 按上述方法显色, 测量其吸光度。从工作曲线中查得相应的铁含量, 计算原试液中铁的含量。

原液中铁的含量（ｕg/ml）=  25.00×ρ（FE）

                                   2.00

七、存在的问题和注意事项

1. 在用磺基水杨酸铁测定Fe3+ 时，在pH=10时形成的配合物稳定，且不容易受干扰，所以在pH=9~ 11.5下测定黄色3：1配位比的产物，pH对实验成败很关键，用NH3-NH4Cl作为缓冲溶液

2.待测溶液一定要在工作曲线线形范围内，如果浓度超出直线的线形范围，则有可能偏离朗-比耳定律是光吸收的基本定律，就不能使用吸光光度法测定。

3. 用移液管移取试剂，注意顺序，并且不能混用移液管

4.比色皿的使用中，每改变一次试液浓度，比色皿都要用待装液润洗干净