SOP微生物限度检验室规程

本规程为无菌操作及微生物限度检验室的保护提供标准化的指导。

2范围SCOPE

微生物限度检验室。

3责任RESPONSIBILITY

微生物检验员负责此操作的执行。

4程序PROCEDURE

4.1微生物限度检验室（简称微检室，下同）设有操作间、洗消间和缓冲间，室内温度保持在20~25℃，湿度保持在45~60%。

4.2微检室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。检验产生的废弃物，含有化学试剂、培养基、细菌的，应按《实验室“三废”处理操作规程》处理。

4.3严防一切对灭菌器具和培养基的污染，已污染的应停止使用。

4.4微检室应备有70~75％的酒精。

4.5微检室每天使用前应开紫外灯30~60min进行消毒。微检室长期不用时，确保每周至少开一次紫外灯30~60min。如遇长假，导致超过一周未开启，需开启紫外灯消毒后，按4.17检查菌落数，根据检查结果进行处理。

4.6需要进入操作间使用的物品均应经过灭菌或消毒，经传递窗送入操作间。吸管、平皿等，均应包扎严密，并应经过170℃、2小时的干热灭菌；培养基和生理盐水等用高压蒸汽灭菌锅灭菌（121℃、30min）。

4.7工作人员进入操作间前，必须用洗手液洗手、再经消毒液（75%酒精）消毒，方可进入操作间进行操作。

4.8操作间使用前必须提前50分钟打开超净工作台的紫外灯，30分钟后关闭紫外灯，同时启动超净台鼓风机吹风。操作完毕，应及时清理操作间。

4.9供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70~75％的酒精棉球消毒外表面。

4.10每次操作过程中，均应做空白对照，以检查无菌操作的可靠性。

4.12接种针/环每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。接种针/环带有水时，先用内焰烤干，再用外焰灼烧，防止灼烧引起飞溅。

4.13带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应用沸水煮过后进行清洗。

4.14如有菌液洒在桌上或地上，应立即用70~75%酒精倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。

4.15凡带有活菌的物品（如培养细菌后的锥形瓶、平皿、试管），必须经过高压灭菌锅煮沸水杀菌30分钟后，才能进行常规的清洗，防止污染环境或传播致病菌。

4.16已知带菌的物品，不应带入微检室。例如菌种、长有菌落的培养皿。需要做阳性对照试验的，应转至阳检室进行操作。

4.17微检室应每周检查菌落数。

4.17.1在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿4个，分别注入融化、灭菌并冷却至约45℃的营养琼脂培养基15ml，2个在超净台内放至凝固后，盖上皿盖，倒置于30～35℃培养箱培养48小时后计数。另外2个在传递窗上方放至凝固后等待30min，盖上皿盖，倒置于30～35℃培养箱培养48小时后计数。

4.17.2超净工作台内的2个平皿的平均菌落数不应大于1CFU，传递窗上方的2个平皿的平均菌落数不应大于10CFU。

4.17.3微检室检查合格后可进行正常检验，如不合格，需进行彻底的环境清洁、空调系统的清洁，再使用臭氧灭菌2h，再重复检验，直至检查合格。

5相关文件RELEVANTDOCUMENT

生效日期