酵母菌检测方案

一、实验材料与仪器

1. 材料及用量：

油豆腐：25g 

蛋白胨5g

葡萄糖10g

磷酸二氢钾1g 

硫酸镁(MgSO4·7H2O)　0.5g 

琼脂　20g 

1/3000孟加拉红溶液　100mL 

无菌水　1000mL 

氯霉素　0.1g 

氢氧化钠 1mol/l  稀盐酸 1mol/l　

乙醇1ml

2. 仪器：

培养基制备所需仪器：

电磁炉、搪瓷杯、漏斗、铁架台、3个250ml锥形瓶、电子天平、1000ml烧杯、1500ml烧杯、2个50ml烧杯、玻璃棒、纱布、棉花和棉线、高压灭菌锅，石棉网、称量纸若干

接种培养所需仪器：

无菌室、恒温培养箱、涂布棒、6支1ml移液管、10ml 吸量管3支、100ml量筒1个、5个25ml试管、9个培养皿、标签纸两大张、

原料处理所需仪器：

乳钵、250ml锥形瓶，玻璃珠，镊子，剪刀

二、实验流程

（1）仪器预处理：

     制作棉塞

 将镊子、250ml锥形瓶、移液管、吸量管，试管，培养皿、涂布棒、棉塞

（2）孟加拉红培养基的配置：

　　分别称取蛋白胨5g、葡萄糖10g、磷酸二氢钾1g 、硫酸镁(MgSO4·7H2O)　0.5g 备用；用烧杯量取1000ml无菌水，取琼脂20g剪碎后放入搪瓷杯中，加入500ml水加热搅拌至琼脂完全溶解，将上述已称取备用的样品一同加入至琼脂溶液中混合均匀，用1ml乙醇溶解氯霉素0.1g并加入溶液中混合均匀，补水至1000ml，调节PH值至7.2左右，趁热分装至6个锥形瓶，包扎好后，再标记，进行高压灭菌，条件是121℃ 25min，灭菌后在倒9个平板备用。 

（3）样品的预处理：

     称取腐乳25g，用灭菌后的镊子从两个对角处和中间位置各取适量样品于10ml无菌水中，搅拌均匀；采用十倍稀释法对样品进行稀释，稀释2次，且每一稀释度更换一支移液管，每次反复吹吸50次左右。

（4）接种

     在无菌室中，选取三个不同的稀释度，每个稀释度分别用A、B、C三个培养皿进行培养，倒平板后，冷却后，将1ml稀释液倾注在培养基表面并用无菌涂布棒将样品均匀涂布，培养皿倒置，贴好标签，进入恒温箱培养24小时，温度在25~28℃，观察菌落生长情况，并及时做好记录。

（5）酵母菌菌落形态

在孟加拉红培养基上酵母菌菌落呈红色，表面光滑无绒毛，表面凹凸不平。

（6）菌落个数计数法

     肉眼观察，并数出每种稀释度的A、B、C平板中的单个菌落数，一菌落形成单位CFU表示。,分别计数为N1、N2、N3。 每种稀释度的平板菌落数=(N1+N2+N3)／3 ；（30至100为有效平板）

（7）实验数据的记录与处理

     记录好实验数据，对于不同的稀释度：

菌种数量=三个平板（相同稀释度）菌落数的平均值×稀释倍数

数据处理表格