溶血实验报告(鸡血细胞)

一，实验目的

1、学习引起红细胞溶解的各种方法，观察溶血现象。

2、了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。

二，实验原理

将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内使细胞涨破，血红蛋白释放到介质当中，介质由不透明的细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液（此时的细胞膜收缩，会略有不溶性内容物），这种现象称为溶血。

红细胞在等渗盐溶液中短时间之内不会发生溶血，但是由于红细胞的细胞膜对不同物质的通透性不同，时间久了，膜两侧的渗透压平衡会被打破，也会发生溶血。

由于各种溶质透过细胞膜的速度不同，因此发生溶血的时间也不相同。发生溶血现象所需的时间，可以作为测量某种物质进入红细胞速度的指标。即溶血时间对应着穿膜速度

三，实验材料和试剂

鸡血、试管若干、移液管若干、洗耳球、0.85%NaCl溶液、0.085%NaCl溶液、0.8mol/L（0.3Mol/L等渗）甲醇溶液、0.8mol/L（0.3Mol/L等渗）丙三醇溶液、6%（5%等渗）葡萄糖溶液、2%（1.5%等渗）Triton X-100

四，实验步骤

1,取鸡血7ml，加入0.85%的NaCl溶液3mL，在1000r/min条件下离心5分钟。（RBC压积量不少于0.6mL）

2,剩余沉淀量1ml左右，将上述离心后的剩余红细胞按照沉淀量配成50%浓度（总体积应不少于1.2mL）

每组取6支试管，分别加入如下溶液3mL

 （1）0.85%NaCl溶液

 （2）0.085%NaCl溶液

 （3）0.8mol/L（0.3Mol/L等渗）甲醇溶液

 （4）0.8mol/L（0.3Mol/L等渗）丙三醇溶液

 （5）6%（5%等渗）葡萄糖溶液

 （6）2%（1.5%等渗）Triton X-100

4,向上述6支试管中分别加入50%红细胞悬液3滴，轻轻摇匀，（4）（5）号试管在加入红细胞悬液后，立即混匀，制片。观察0min时的微观情况。并且之后（4）号试管每10分钟观察记录一次微观情况。（5）号试管每20min观察记录一次微观情况。观察试管中是否有溶血现象发生，记录溶血时间，并于显微镜下观察各溶液中的细胞。

五，实验结果

0.85%NaCl溶液（10×40）：

0.085%NaCl溶液（10×40）：

0.8mol/L（0.3Mol/L等渗）甲醇溶液（10×40）：

0.8mol/L（0.3Mol/L等渗）丙三醇溶液（10×40）：

1号溶液和鸡血等渗，在短时间内不发生溶血（时间若过长，膜两侧的渗透压平衡会被打破，也会发生溶血），因此本次实验中控制溶血观察时间在lh内；

2号溶液为低渗溶液，发生完全溶血，因此可将1号、2号溶液作为对照和另四种溶液进行比对；

3号甲醇溶液中的鸡血红细胞溶血速度很快，在几秒内就已完全溶血，因甲醇的脂溶性高、分子量小，进入细胞的速度很快，因此在操作过程中要求速度快；

4号丙三醇溶液虽然脂溶性较高，但分子量较大，因此进入细胞的速度慢，溶血过程缓慢，在10min左右发现细胞内有亮点是因为丙三醇进入细胞，且其对光的折射率很高，使细胞看上去有亮点。

5号葡萄糖溶液，因其分子量过大，进入细胞的速度很慢，在1小时的观察中，未发现太多明显溶血现象； .

6号溶液中添加了表面活性剂，可以将膜蛋白抽提出来，使细胞膜的通透性增大，快速发生溶血现象，同时由于有大量膜蛋白被抽提，细胞结构迁到破坏，若操作速度过慢容易观察不到细胞；膜蛋白溶于溶液中使得溶液的透明度没有2号溶液的高。

经过本次实验可以看出，由于溶质的脂溶性、分子量等的差异会导致其进入细胞的速度不同，从而导致溶血时间，上的不同，因此可把发生溶血现象的时间当做一种测量物质进入红细胞速度的指标。