UV法测定兔血浆中茶碱血药浓度实验报告1

14级药检2班  B组

指导老师：况刚、聂旭元

聂桃     1410605425

                           兰梦琪 1410605423   

  郑梦瑶 1410605412

 申周勇  1410605504    

  陈振明 1410605501

一、实验目的

1、了解UV法检测氨茶碱血药浓度的原理。

2、熟悉紫外分光光度计的基本构造和功能。

3、掌握UV法检测兔血中氨茶碱血药浓度的基本过程以及回收率的计算方法。

二、实验原理

氨茶碱为临床常用平喘药，由茶碱与乙二胺缩合而成，在体液中可分离出茶碱。茶碱是甲基嘌呤类药物，为酸碱两性物质。常温下溶于水（1：120）、乙醇（1：18）、氯仿（1：86）、氢氧化钠溶液、稀盐酸等溶剂中，微溶于乙醚中，所以可以用有机溶剂将其从血浆中提取分离，同时血浆蛋白生成沉淀。茶碱的最大吸收波长是274nm。

三、实验器材

实验动物：家兔

实验仪器：1000ml移液、紫外分光光度计、10ml离心管、离心机、涡旋混合器、10ml离心管、注射器、10ml容量瓶、注射器、采血针

实验试剂：茶碱对照品（38.54mg→100ml）、氯仿、异丙醇、pH5.0的磷酸盐缓冲液、0.1mol/l盐酸、0.1mol/l氢氧化钠溶液

四、实验步骤

1、取血及血液前处理

    用剪刀将兔耳动脉周围的毛剪掉。用酒精棉球擦耳朵，使动脉血管扩张,待血管扩张充血后，用一次性采血管针头在动脉末端刺破血管取血。将血液装于有抗凝剂的试管中。将取好的血液于离心机（3000r/min）离心10min。

2制备样品和空白

记样品为A管，取茶碱对照品溶液0.5ml即为样品溶液，加入磷酸盐缓冲液（PH=5）0.6ml，精密加入氯仿4.75ml异丙醇3.65ml；取另一离心管记为B管，除茶碱以蒸馏水代替外，加的所有试剂同A管。将两个离心管旋涡混合5min后，3000r/min离心10min。吸取下层氯仿液层4ml置另一离心管中，加入0.1mol/l氢氧化钠溶液4.0ml，涡旋混匀，3000r/min离心10min，分别吸取上层碱溶液4于10ml的容量瓶中，加入0.1mol/l氢氧化钠稀释至刻度，摇匀。

测定：在274nm波长处测定其吸光度。

计算：根据测定结果计算加样回收率。

五、数据处理    

  对照品吸光度:0.102

  样品吸光度：0.022 

C样=0.3854×0.022／0.102=0.0831mg/ml

加入茶碱对照品的量

六、分析结论

（1）离心后因氯仿：异丙醇（95：5）为乳浊液，所以另加入了异丙醇使氯仿：异丙醇几乎接近（1：1），分层效果较好。

（2）离心时，离心机状况很多，导致离心不够彻底，分离效果差并且使 得结果不准确。

（3）由于测紫外时，电压很不稳定，使得重现性很不好，进而也使得测定数据不准确。以上问题导致此次实验结果不准确。

六、 注意事项

1、兔子采血时注意要在同一伤口，将兔耳低于心脏，采血完毕后要立即止血。

2、离心机往往不尽人意，可适当提高转速和时间，记住离心前要配平。

3、吸取下层氯仿液时要注意将离心管倾斜以便于将移液管深入管底而又防止黏上过多的血浆絮状物。

4、分离血浆时要将血液静止足够长的时间，否则或导致分离效果不理想，无法得到足够量的血浆。

5、如果离心时出现乳化现象，则可以加入一定量的异丙醇。

6、每一步定量要准确，否则会影响结果。