总黄酮含量测定方案

一  样品溶液的制备

      70%乙醇溶液，料液比1﹕8 ，80度下回流2h。 取10g样品放入圆底烧

      瓶中加入80ml  70%乙醇溶液回流2h,抽滤定容至100ml备用。使用时先  

      离心再用70%乙醇稀释10倍做样品溶液。

二  芦丁标准品的配置

      精密称取芦丁2mg，加无水乙醇定容至10ml。制得浓度为0.2mg/ml芦      

      丁标准品溶液。

三  显色方法的确定

1 扫描原液 分别取芦丁溶液和样品溶液各1ml，加无水乙醇定容至  25ml，空白对照，全波扫描。                          

2 铝显色法 分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加5%亚钠 溶液（1.25g亚溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中) 1ml,   摇匀，放置6min，加10%铝溶液(4,4014g铝.九水溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中) 1ml，   摇匀，放置6min，加4%氢氧化钠试液(2g氢氧化钠溶于无水乙醇中定容到50ml容量瓶中）10ml,    再加无水乙醇定容至25ml，摇匀，放置15min， 空白对照，全波扫描 bb      。 

 3 氯化铝显色法   分别取芦丁对照溶液和样品溶液各5ml ,加1%的氯化铝溶液（1g氯化铝溶于无水乙醇中定容到100ml容量瓶中)10ml，摇匀放置10min，空白对照，全波扫描。

4 氢氧化钾显色法 分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加3ml10%氢氧化钾溶液（2.5g氢氧化钾溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中），充分摇匀显色5min后，用无水乙醇定容至25ml, 摇匀，空白对照，全波扫描。

四  显色条件的确定  

五  标准曲线的绘制   

     分别取1ml,2ml,3ml,4ml,5ml,6ml芦丁对照品溶液，按所选的显色方法测定       

     吸光度，绘制标准曲线。

六  精密度实验  

按标准曲线绘制方法，分别准确量取1.0ml芦丁标准液5份，按所选显色       

剂和所确定的最优显色条件在所选波长下测定吸光度。

取火棘果样品5份各10g,按提取步骤制得样品液，按制备标准曲线方法显  

色后测定吸光度值并计算总黄酮含量。

取制备好的同一样品溶液，将其显色后每10min测定一次，共测定7次，       

记录吸光度并计算总黄酮含量。

      分别准确量取已知总黄酮含量为        mg/ml的1ml提取液5份，分别  

      加入一定量芦丁标准品，按上述方法进，测定吸光度，计算黄酮含量，根      

      据回收率公式计算出加样回收率。

      回收率=（混合后测得量—样品中总黄酮含量）/芦丁标准品加入量       

         *100

分别取3份样品溶液各1ml, 按制备标准曲线方法显色后测定吸光度值并计算总黄酮含量。