_一测多评_法测定丹参酚酸类成分的含量

“一测多评”法测定丹参酚酸类成分的含量

杨菲

1，2，3

，王智民1，2，张启伟1，2，冯伟红1，

2*

（1.中国中医科学院中药研究所，北京100700；

2.中药质量控制技术国家工程实验室，北京100700；

3.天津中医药大学，天津300193）

［摘要］目的：建立适合于中药特点的利用一个对照品同步测定丹参中多种酚酸类成分的分析方法，并进行方法学考察。方法：以中药丹参为研究对象，以丹参素钠（sodium danshensu ）为内参物，建立原儿茶醛（protocatechuic aldehyde ）、迷迭香酸（rosmarinic acid ）、

紫草酸（lithospermic acid ）和丹酚酸B （salvianolic acid B ）与丹参素钠的相对校正因子。采用外标法测定丹参素钠，用相对校正因子计算丹参中其他4种酚酸类成分的含量；并将“一测多评”法的计算值与外标法实测值用相对偏差进行评价，以验证“一测多评”法的准确性和适用性。结果：丹参酚酸类成分“一测多评”法的计算结果与外标法的实测值之间没有显著性差异，相对偏差＜5%，实验所得的相对校正因子可信。结论：一测多评的质量评价模式在中药丹参酚酸类成分的多指标质量评价中得到验证，可为后续《中国药典》的品种修订提供参考。

［关键词］一测多评；HPLC ；丹参；酚酸；相对校正因子

［稿件编号］20110615007

［基金项目］“国家重大新药创制”科技重大专项（2009ZX09301-005和2009ZX09308-003）；2007年中医药行业科技专业资助项目（200707009）*

丹参始载于《神农本草经》，列为上品，为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎

［1］

，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的功效。其有效成分分为脂溶性、水溶性两部分，前者主要

含有二萜类化合物，后者则为酚酸类化合物。研究

发现，丹参中的水溶性酚酸类成分主要有丹参素（danshensu ）、原儿茶醛（protocatechuic aldehyde ）、丹酚酸A （salvianolic acid A ）、丹酚酸B （salvianolic acid B ）、迷迭香酸（rosmarinic acid ）、紫草酸（litho-spermic acid ）、丹酚酸D （salvianolic acid D ）和丹酚酸E （salvianolic acid E ）等。现代药理研究亦证明，丹参酚酸类成分具有改善微循环、抑制血小板聚集、抗氧化、增加冠脉流量及心肌供氧量等作用，是

丹参祛瘀、活血的主要活性成分［2］

。2010年版《中国药典》仅以丹酚酸B 为其水溶性成分的检测指标，尽管丹酚酸B 含量较高，但仍难以真正体现和保障丹参的内在质量，传统中医的整体观要求对中药材进行多药效成分指标的综合评

价。由于丹酚酸B 的结构特点，其化学性质极不稳

定，

长期以来一直面临对照品难得、货源严重紧缺和检测成本昂贵的问题。那么，如何在对照品供应不足或缺省的情况下实现对中药丹参水溶性成分的整

体控制，

是目前中药丹参质量控制中亟待解决的关键问题和技术标准难题。“一测多评”（quantitative analysis of ulti-compo-nents by single-marker ，QAMS ）技术为解决这类问题提供了一个可供选择的方法，这一模式已被2010年版《中国药典》一部收载。本文重点探讨了“一测多

评”

法在丹参酚酸类成分多指标质量评价中的技术适用性和可行性。1材料1.1

仪器

Waters Alliance 高效液相色谱仪，包括2695溶

剂管理系统，

2996二极管阵列检测器，Empower 2色谱工作站（美国WATERS 公司）；Shimadzu LC-

20A 高效液相色谱仪，包括LC-20AT 溶液传输单元，SIL-20A 自动进样器，SPD-M20A 二极管阵列检测器，LC Solution 色谱工作站（日本岛津公司）。

1.2对照品

丹参素钠（批号855-200102），原儿茶醛（批号110810-200506），迷迭香酸（批号111871-201001），

医药科技有限公司，纯度均＞98%。

1.3药材

丹参市售饮片购自各地药材商店/市场，经中国中医科学院中药研究所王智民研究员鉴定为唇形科

植物丹参S .miltiorrhiza 的干燥根及根茎。1.4试剂

甲醇色谱纯，水高纯水，其余试剂均为分析纯。2方法与结果

2.1一测多评的方法学考察

2.1.1

色谱条件

Xtimate TM C 18色谱柱（4.6mm ˑ250mm ，5μm ），流动相：乙腈（A ）-3%甲酸水溶液（B ），梯度

洗脱，0 80min ，0% 33%A ，流速1mL ·min －1

，柱温30ħ，检测波长280nm 。理论板数按丹参素峰计算应不低于6000。见图1

。

A.丹参供试品；

B.丹参酚酸对照品；1.丹参素；2.原儿茶醛；

3.迷迭香酸；

4.紫草酸；

5.丹酚酸B 。

图1丹参HPLC 图谱

2.1.2

供试品溶液的制备

取丹参粉末（过40目筛）约0.5g ，

精密称定，置滤纸包中，精密称定，置100mL 圆底烧瓶中，精密加入纯净水50mL ，称定质量，置电热套（250W ，150ħ）中加热回流2h ，取下，放冷，再称定质量，用纯

净水补足减失的质量，摇匀，用0.22μm 微孔滤膜过滤，取续滤液，备用。2.1.3

对照品溶液的制备

精密称取丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草

酸及丹酚酸B 对照品各约4.00mg ，置10mL 量瓶

中，加甲醇至刻度，配成浓度约为0.4g ·L －1

的混合0.003mL 置2mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液2# 9#（质量浓度分别约为①0.400

g ·L －1，②0.300g ·L －1，③0.200g ·L －1，④0.100g ·L －1，⑤0.0500g ·L －1，⑥0.0250g ·L －1，⑦0.0120g ·L －1，⑧0.00600g ·L －1，⑨0.000600g ·L －1）。2.1.4

线性范围

分别精密吸取2.1.3项下9个浓度的混合对照品溶液10μL 注入高效液相色谱仪。以测得的响应信号（峰面积）和被测物的量，用最小二乘法进行线性回归，得到各成分的回归方程以及线性范围。结果表明：丹参酚酸混合对照品溶液在如下范围内成良好的线性关系，结果见表1。

表1

丹参酚酸的线性范围（n =2）

化合物回归方程

r

线性范围/μg

丹参素钠Y =6.40ˑ106X －1.13ˑ1040.99950.0060 4.00原儿茶醛Y =4.71ˑ107X －7.38ˑ1040.99950.0062 4.10迷迭香酸Y =1.88ˑ107

X －4.10ˑ104

0.99960.0060 4.06紫草酸Y =1.16ˑ107X －1.87ˑ104

0.99960.0061 4.04丹酚酸B

Y =1.11ˑ107X －1.82ˑ10

4

0.99960.0062 4.12

2.2丹参酚酸HPLC 同步测定的方法学考察2.2.1

精密度试验

取同一份丹参供试品溶液于同1d 和3d 内重复进样，测定丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸和

丹酚酸B 5个酚酸类成分的峰面积，计算RSD 。结果日内精密度，各成分峰面积的RSD 分别为0.42%，0.43%，0.50%，1.0%，0.57%；日间精密度各成分峰面积的RSD 分别为0.67%，0.%，0.59%，0.78%和0.86%，表明仪器的精密度良好。2.2.2

重复性试验

取同一批丹参药材粉末（过40目筛）约0.5g ，精密称定，按2.1.2项下方法平行制备6份供试品溶液，测定峰面积，计算药材含量及RSD 。结果测得丹参中丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B 5个酚酸类成分的含量分别为0.351%，0.0215%，0.191%，0.231%，3.53%，RSD 分别为3.5%，2.2%，1.6%，3.3%和2.0%，表明该方法的重复性良好。2.2.3稳定性试验

2.2.4加样回收率试验

取已知含量的丹参粉末约0.25g（丹酚酸B加样回收率取丹参粉末0.025g）（过40目筛），精密称定，平行6份，分别按药材含量-对照品（1ʒ1）的比例加入一定量的对照品溶液，按2.1.2项下方法制备供试品溶液，测定并计算各成分的加样回收率以及RSD。结果丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B5个酚酸类成分的加样回收率分别为100.2%，99.9%，99.9%，100.3%，101.6%，RSD分别为0.41%，0.66%，1.5%，1.0%，1.1%，表明该方法的准确度良好。见表2。

表2加样回收率试验结果

成分称样量/g含量/mg加入量/mg测得总量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%丹参素0.25020.240.9 1.8618100.6100.20.41

0.25020.24 1.8539.7

0.25000.24 1.8614100.5

0.25000.24 1.855799.9

0.25020.24 1.8563100.0

0.25000.24 1.8634100.7

原儿茶醛0.25010.04700.0510.097699.199.90.66

0.25020.04700.0984100.8

0.25000.04700.0981100.2

0.25010.04700.097699.2

0.25010.04700.0985100.3

0.25010.04700.098399.9

迷迭香酸0.25010.52970.508 1.0387100.299.9 1.5

0.25020.5297 1.030098.5

0.25000.5297 1.0298.4

0.25010.5297 1.033399.1

0.25000.5326 1.0480101.9

0.25000.5326 1.0459101.4

紫草酸0.25000.51760. 1.1591100.2100.3 1.0

0.25000.5176 1.1508.9

0.25000.5176 1.154699.5

0.25000.5176 1.1684101.7

0.25000.5176 1.1584100.1

0.25000.5176 1.16101.1

丹酚酸B0.02503 1.10200.766 1.8842102.1101.6 1.1

0.02503 1.1020 1.8842103.1

0.02503 1.1020 1.15102.3

0.02503 1.1020 1.8853100.9

0.02503 1.0539 1.8751100.4

0.02506 1.0539 1.8231100.5

2.3相对校正因子的确定

2.3.1丹参中待测指标相对校正因子的计算

以丹参素钠为内参物，根据相对校正因子计算公式［3］，分别计算各待评价成分原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B与内参物丹参素钠的相对校

针对可能影响相对校正因子重现性的一些因素，设计了一系列实验，重点考察不同实验条件对相对校正因子重现性的影响。

2.3.2.1

不同仪器对相对校正因子的影响试验在不同实验室进行，采用Xtimate TM C18（4.6mmˑ

果各成分相对校正因子重复性良好（RSD ＜5%）。

见表4。2.3.2.2

不同色谱柱对相对校正因子的影响试

验在同一实验室进行，采用Waters Alliance 和Shi-madzu LC-20A 2种不同的高效液相色谱系统，分别

考察了4种不同型号规格的色谱柱对丹参酚酸相对校正因子的影响，

结果各成分相对校正因子重现性良好（RSD ＜5%）。见表5，

6。表3

丹参酚酸的相对校正因子考察（n =2）

浓度（No.）相对校正因子

f 原儿茶醛/丹参素钠

f 迷迭香酸/丹参素钠

f 紫草酸/丹参素钠

f 丹酚酸B /丹参素钠

1#7.707 2.863 1.825 1.7622#7.750 2.911 1.857 1.8073#7.473 2.725 1.792 1.6844#7.585 2.946 1.839 1.7585#7.547 2.942 1.824 1.7486#7.544 2.950 1.836 1.7547#7.492 2.931 1.818 1.7388#7.496 2.936 1.824 1.7409#7.436 2.910 1.806 1.725RSD /%

1.4

2.5

1.0

1.9

表4

不同仪器对相对校正因子的影响（n =2）

仪器

相对校正因子

f 原儿茶醛/丹参素钠

f 迷迭香酸/丹参素钠

f 紫草酸/丹参素钠

f 丹酚酸B /丹参素钠

Waters_Alliance_17.361 2.658 1.759 1.661Waters_Alliance_27.839 2.866 1.809 1.820Shimadzu LC20A 7.658 2.860 1.814 1.684RSD /%

3.2

4.2

1.7

5.0

表5

不同色谱柱对相对校正因子的影响—

——Waters Alliance （n =2）色谱

相对校正因子

f 原儿茶醛/丹参素钠

f 迷迭香酸/丹参素钠

f 紫草酸/丹参素钠

f 丹酚酸B /丹参素钠

Kromasil 7.269 2.701 1.735 1.725Gemini_NX 7.616 2.838 1.842 1.742Xtimate TM 7.361 2.658 1.759 1.661Spursil 7.206 2.653 1.727 1.703RSD /%

2.5

3.2

3.0

2.1

表6

不同色谱柱对相对校正因子的影响—

——Shimadzu LC20A （n =2）色谱

相对校正因子

f 原儿茶醛/丹参素钠

f 迷迭香酸/丹参素钠

f 紫草酸/丹参素钠

f 丹酚酸B /丹参素钠

Kromasil 7.514 2.942 1.829 1.635Gemini_NX 7.629 2.994 1.906 1.784Xtimate TM

7.658 2.860 1.814 1.684Spursil 7.863 3.094 1.942 1.796RSD /%

1.9

3.3

3.3

4.5

表7不同流速对相对校正因子的影响（n=2）

流速

/mL·min－1

相对校正因子

f

原儿茶醛/丹参素钠

f

迷迭香酸/丹参素钠

f

紫草酸/丹参素钠

f

丹酚酸B/丹参素钠

1.17.451

2.770 1.762 1.718 1.07.361 2.658 1.759 1.661 RSD/%0.9 2.90.1 2.4

2.3.2.4不同柱温对相对校正因子的影响试验在同一实验室进行，采用Waters Alliance高效液相色谱系统和Xtimate TM C18色谱柱，分别考察了不同柱温（35ħ和30ħ）对丹参酚酸相对校正因子的影响，结果各成分相对校正因子重现性良好，见表8。

表8不同柱温对相对校正因子的影响（n=2）

柱温/ħ

相对校正因子

f

原儿茶醛/丹参素钠

f

迷迭香酸/丹参素钠

f

紫草酸/丹参素钠

f

丹酚酸B/丹参素钠

357.559 2.901 1.825 1.746 307.361 2.658 1.759 1.661 RSD/% 1.9 6.2 2.6 3.5

2.4QAMS法待测色谱峰的定位

“一测多评”法色谱峰的准确定位一般可以采

用保留时间差或相对保留值等参数结合色谱图整体

特征，以及每个峰的紫外吸收特征来定位其余待测

成分（a，b，…，i，…）色谱峰［4］。相对保留值指各待

测成分与内参物s间保留时间的比值，计算公式：

r as =t

Ra

/t

Rs

；保留时间差指各待测成分与内参物S间

保留时间的差值，计算公式：Δt Ras=t Ra－t Rs。

本研究分别考察相对保留值和保留时间差在不

同品牌仪器和不同规格色谱柱中的重现性。结果表

明相对保留值的波动较为明显，RSD＞5%，不太适合

作为待测成分色谱峰定位的依据，保留时间差的波动

相对较小，因此采用保留时间差法进行丹参中酚酸类

待测成分色谱峰的定位较为可行。见表9，10。

表9QAMS法待测成分色谱峰的定位———相对保留值法

仪器色谱柱

相对保留值

r

原儿茶醛/丹参素钠

r

迷迭香酸/丹参素钠

r

紫草酸/丹参素钠

r

丹酚酸B/丹参素钠

Waters Alliance Kromasil 1.440 3.955 4.044 4.313 Xtimate TM 1.919 4.027 4.150 4.432

Gemini_NX 1.452 4.405 4.613 4.965

Spursil 1.495 4.142 4.299 4.605 Shimadzu LC20A Kromasil 1.391 3.670 3.750 3.987 Xtimate TM 1.362 3.737 3.847 4.095

Gemini_NX 1.446 4.331 4.529 4.871

Spursil 1.447 3.906 4.048 4.321 RSD/%11 6.57.37.8

2.5QAMS法与外标法测定结果的比较

首先采用外标法对丹参中5种酚酸类成分进行多成分同步含量测定，再用建立的QAMS法对其含量进行计算，并将2种方法计算的结果进行比较，以验证QAMS法用于酚酸类多指标成分质量评价的准确性。结果表明，2种方法测得的丹参酚酸类成分含量没有显著性差异，相对偏差＜5%，提示建立的方法具有较好的可信度。见表11。

表10QAMS法待测成分色谱峰的定位———保留时间差法

仪器色谱柱

保留时间差/min

Δt R原儿茶醛/丹参素钠Δt R迷迭香酸/丹参素钠Δt R紫草酸/丹参素钠Δt R丹酚酸B/丹参素钠

Waters Alliance Kromasil 6.03240.52241.75345.437 Xtimate TM 5.43440.55942.21245.986

Gemini_NX 5.390.28442.67746.824

5.330.18042.24

6.797

Spursil 6.350.31242.32446.239 Shimadzu LC20A Kromasil 6.13041.87043.12546.834 Xtimate TM 5.55541.963.65947.457

Gemini_NX 5.50241.87844.38448.560

Spursil 6.45441.95744.00147.947

RSD/%8.0 2.1 1.9 1.8

表11QAMS法与外标法同步测定丹参中酚酸类成分的含量（n=2）%

No.产地/来源丹参素

外标法

原儿茶醛迷迭香酸紫草酸丹酚酸B 外标

法

QAMS

法

相对

偏差

外标

法

QAMS

法

相对

偏差

外标

法

QAMS

法

相对

偏差

外标

法

QAMS

法

相对

偏差

1四川康贝0.2940.01270.0129 1.40.0820.084 1.90.1540.159 3.2 2.18 2.13 2.1 2苏州雷允上0.30.02650.0268 1.40.1990.202 1.90.2210.228 3.2 3.8 3.75 2.1 3河北医药0.3630.01860.01 1.30.1830.187 1.90.2210.228 3.2 3.51 3.44 2.1 4山东市售0.3630.01620.0165 1.40.1170.119 1.90.2090.216 3.2 3.25 3.19 2.1 5苏江粤海0.430.02870.0291 1.40.1750.178 1.90.250.259 3.2 4.16 4.07 2.1 6江苏泰兴市0.3160.01400.0142 1.40.1320.135 1.90.170.175 3.2 2.7 2.65 2.1 7河北同济0.3610.01690.0172 1.30.2030.207 1.90.2460.254 3.2 3.76 3.68 2.1 8购于0.5530.04280.0434 1.40.09230.094 1.90.1440.149 3.2 2.22 2.17 2.1 9健康大药房0.2460.01470.0149 1.40.1120.113 1.90.1620.167 3.2 2.17 2.12 2.1 10河北神威0.2750.01560.0159 1.40.1060.108 1.90.1850.191 3.2 2.81 2.75 2.1 11河北赵县0.3040.01510.0153 1.30.09450.096 1.90.1760.182 3.2 2.57 2.52 2.1 12购于黑龙江0.3750.02190.0222 1.30.1870.191 1.90.2420.25 3.2 3.99 3.91 2.1 13安徽康恩药店0.3690.02350.0238 1.40.2070.211 1.90.2120.219 3.2 3.28 3.21 2.1 14广东康美0.3510.02760.0280 1.40.09980.101 1.90.1710.176 3.2 1.9 1.86 2.1 15广东中山家康0.5230.04790.0485 1.30.1860.19 1.90.2450.253 3.2 3.37 3.3 2.1 16广东中山市恒瑞药业0.3120.01600.0162 1.30.1580.16 1.90.1630.168 3.2 2.94 2.88 2.1 17购于广州（产地甘肃）0.360.01810.0183 1.40.1360.139 1.90.2170.224 3.2 3.03 2.97 2.1 18广州市岭南0.370.05030.0509 1.30.08150.083 1.90.1620.167 3.2 1.73 1.69 2.1 19昆明福林堂0.3370.01540.0156 1.40.1360.1385 1.90.1960.202 3.2 3.42 3.35 2.1 20昆明圣爱0.4360.05590.0567 1.30.1960.2 1.90.2120.219 3.2 3.25 3.18 2.1 21上海市售0.410.02230.0226 1.30.1740.178 1.90.2350.242 3.2 3.9 3.883 2.1 22北京0.3690.01780.0181 1.70.1980.202 2.00.2310.238 3.2 3.707 3.631 2.0

2.6QAMS法的再验证［4］

另取丹参样品10批，按照QAMS法进行含量测定，利用所建立的QAMS法进行10批丹参样品的实际测算，得到其含量计算值；然后再以多成分同步测定方法（外标法）进行反证，进一步验证QAMS法的合理性。2种方法测得的酚酸类成分含量无显著性差异，相对偏差＜5%，表明建立的QAMS法在丹参酚酸类成分检测中的适宜性良好，可用于标准的起草与制定，见表12。

表12QAMS法测定丹参中酚酸类成分的再验证（n=2）%

No.产地/来源丹参素原儿茶醛迷迭香酸紫草酸丹酚酸B

外标法

外标

法

QAMS

法

相对

偏差

外标

法

QAMS

法

相对

偏差

外标

法

QAMS

法

相对

偏差

外标

法

QAMS

法

相对

偏差

1沈阳东北连锁大药房0.2840.01510.0149 1.30.1140.1122 1.90.1720.167 3.2 2. 2.95 2.1 2天津源盈药店0.3390.01610.0159 1.30.1680.1 1.90.2250.218 3.2 3.55 3.62 2.1 3购于0.40.02900.0286 1.40.1480.145 1.90.2690.26 3.2 3.52 3.59 2.1 4昆明一心堂0.3630.02150.0212 1.40.1360.133 1.90.2240.217 3.2 3.61 3.68 2.1 5河南中医学院一附院0.4550.02560.0252 1.40.3240.31 1.90.3530.342 3.2 5.12 5.23 2.1 6购于沈阳（产地山东）0.3750.02120.0209 1.40.1840.18 1.90.2220.215 3.2 3.42 3.49 2.1 7山西药材公司0.2920.01670.0165 1.30.0950.093 1.90.1630.158 3.2 2.42 2.47 2.1 8山西华龙药店0.1450.01430.0141 1.30.0210.02 1.90.0750.072 3.20.820.84 2.1 9山西惠民药店0.3690.01090.0108 1.40.1840.18 1.90.2310.224 3.2 3.58 3.65 2.1 10河北市售0.1230.00530.0052 1.30.8280.812 1.90.01910.019 3.20.230.24 2.1

3讨论

检测波长的选择采用二极管阵列检测器，在190 800nm波长下对供试品溶液和对照品溶液进行了全波长扫描，并对相应吸收波长下的供试品色谱图进行了分析，结果在270 290nm波长下丹参五种酚酸吸收峰均为最大吸收，且色谱峰分离度良好，全部达到基线分离，各待测成分色谱峰纯度角均小于纯度阈值，表明各色谱峰内无杂质干扰。故采用280nm作为检测波长。

相对校正因子重现性本试验选用化合物性质相对稳定，对照品相对易得且价廉的丹参素钠为内参物，建立该成分与其他4种酚酸类成分间的相对校正因子。通过对30余批丹参药材与饮片的测定，验证了该色谱方法的精密度、重现性、稳定性、系统适应性和QAMS法的准确性，并对QAMS法的适用性和可行性进行了探讨研究。结果表明，QAMS法推算的含量与实测法所得含量没有显著性差异，提示试验建立的相对校正因子具有较好的可信度。

丹参含量测定结果显示，药材中丹参素与原儿茶醛，迷迭香酸，紫草酸及丹酚酸B的相对浓度比分别约为20/1，3/1，2/1及1/10，因此在对丹参酚酸相对浓度比约为1/1的条件参数进行相对校正因子考察的同时，还根据药材中酚酸类成分的不同相对浓度比的条件参数对其相对校正因子进行了考察，结果原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B与丹参素钠的相对校正因子分别为6.6，2.927，1.657，1.748，2种条件参数下的相对校正因子进行比较，相对标准偏差小于5%，表明不同相对浓度比条件下丹参酚酸的相对校正因子之间无显著性差异。

QAMS法待测色谱峰的定位在本研究中通过考察相对保留值和保留时间差在不同品牌仪器和不同规格色谱柱中的重现性，选择保留时间差作为色谱峰定位依据。由实验数据见表10的统计中可以发现，不同型号的色谱柱对原儿茶醛的选择性较强，相对标准偏差略大于5%，而对其余成分的选择性相对较弱，相对标准偏差均在2%左右波动。因此为了保证QAMS法待测色谱峰的准确定位，可参照《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》规定，对试验所需色谱柱型号和规格进行规定，即可获得满意结果。

实验中建立的丹参酚酸同步测定的方法同样适用于丹酚酸A，但是由于丹酚酸A自身化学性质不稳定，重复性试验相对标准偏差较大，因此未对其进行回收率试验。试验中发现丹参的供试品溶液在样品制备后9.5h内、对照品溶液24h内丹酚酸A含

·

8732

·

量相对稳定，因此在考察上述丹参酚酸类成分间相对校正因子的耐用性和系统适应性的同时，也对丹酚酸A与丹参素钠间的相对校正因子进行了考察，结果显示其相对校正因子（f丹酚酸A/丹参素钠=4.254，RSD4.1%，n=13）较为稳定，保留时间差的定位方法（Δt R=51.55min，RSD1.7%，n=8）同样适用于丹酚酸A，因此在中药丹参的生产过程控制中可采用此QAMS法对丹酚酸A进行检测。

综上，本实验建立的丹参中酚酸类成分的QAMS测定方法，可同时检测多种酚酸类成分。由于酚酸类成分稳定性不好，纯化难度大，价格昂贵，而丹参素钠对照品相对廉价易得且在丹参中含量居中，因此选择丹参素钠为内参物，更能体现QAMS 方法的简便、易操作、低成本特点。在缺少对照品的情况下，利用成分间的相对校正因子对药材进行质量控制是快速、廉价的。QAMS法将是中药多组分同步定量的发展方向。

［参考文献］

［1］中国药典.一部［S］.2010：70.

［2］王逸平，宣利江.中药现代化的示范性成果———丹参多酚酸盐及其注射用丹参多酚酸盐的研究与开发［J］.成果与应用，2005，20（5）：377.

［3］王智民，高慧敏，付雪涛，等.“一测多评”法中药质量评价模式方法学研究［J］.中国中药杂志，2006，31（23）：1925.

［4］王智民，钱中直，张启伟，等．一测多评法建立的技术指南［J］．中国中药杂志，2011，36（6）：657.

A quantitative method for simultaneous assay of five ingredients with

one marker in Salvia miltiorrhiza

YANG Fei1，2，3，WANG Zhimin1，2，ZHANG Qiwei1，2，FENG Weihong1，2*

（1.Institute of Chinese Materia Madica，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing100700，China；

2.National Engineering Laboratory for Quality Control Technology of Chinese Herbal Medicines，Beijing100700，China；

3.Tianjin University of Traditionl Chinese Medicine，Tianjin300193，China）

［Abstract］Objective：To establish a new quantitative method for simultaneous determination of multi-components in Salvia miltiorrhiza by using one chemical reference substance and validate its feasibilities.Method：The new quality evaluation method，quantitative analysis of multi-components by singer-marker（QAMS），was established and validated with S．miltiorrhiza.Five main ingredients were selected as analytes to evaluate the quatity and their relative correlation factors（RCF）were determined by HPLC-DAD.Within the linear range，the values of RCF at280nm of sodium danshensu to protocatechuic aldehyde，rosmarinic acid，litho-spermic acid and salvianolic acid B were7.559，2.901，1.825and1.746，respectively.The contents of danshensu in the samples of S．miltiorrhiza were determined by using the external standard method，and the contents of the four other ingredients were calculated by their RCFS.The contents of these four ingredients in all samples were also determined by the external standard method.Result：With-in a certain range，the RCFs showed good reproducibility（RSD1.0%-2.5%）.No significant differences were observed between the quantitative results of the two methods.Conclusion：It is feasible and suitable to evaluate the quality of S．miltiorrhiza and its pro-cessed products by QAMS.

［Key words］quantitative analysis of multi-components by single-marker（QAMS）；HPLC；Salvia miltiorrhiza；phenolic acid；relative correlation factor

doi：10．4268/cjcmm20111715

［责任编辑丁广治］

·

9732

·