生物化学实验教学大纲

课程编码：生-0301-制

适用对象：基础药学（理科基地）专业

一、前言

《生物化学》实验内容包括生物分子的理化性质、定性定量分析、分离纯化、生物学性质等实验原理和技术等。

本课程要求学生掌握针对生物分子相关实验的技能，加深对《生物化学》基本理论、基本概念、基本知识、基本技术原理及技能的理解，从总体水平进行实验的设计，进一步加强并提高综合分析问题及解决问题的能力，为从事药学创新研究中涉及的生物分子结构、功能、结构与功能关系等的基础与应用基础研究奠定坚实基础。

总学时为，学分2.0，本实验课为课内实验，但单独考核并记载成绩。

教材选用张景海主编《生物化学实验》，中国医药科技出版社2006年出版。

本课程是基础药学（理科基地）专业的必修课。

二、课程内容与要求

实验一  葡聚糖凝胶层析                                               （4学时）

[基本内容]

凝胶层析的基本原理，常用凝胶的类型。葡萄糖凝胶的组成、结构、亲水性、规格、葡聚糖凝胶层析分离混合物的原理、凝胶的预处理、层析柱的装填、加样、洗脱、收集，结果检测及凝胶的回收处理。

[基本要求]

掌握葡聚糖凝胶层析分离混合物的原理和方法。

了解常用凝胶的类型和葡聚糖凝胶的特性。

实验二  聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳                                      （6学时）

[基本内容]

采用不连续系统聚丙烯酰胺的凝胶将蛇毒蛋白浓缩后，采用碱性缓冲液，经过分子筛、电荷效应将不同蛋白成分分离，经过考马斯亮蓝显色成不同的区带进行观察。

[基本要求]

掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理。

熟悉盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作技术，并用于分离蛇毒蛋白。

实验三  碱性蛋白酶的活力测定                                      （6学时）

[基本内容]

在碱性蛋白酶的最适条件下，通过测定15分钟内该酶催化其底物—酪蛋白的水解反应速度，测定样品—碱性蛋白酶的活力。而酶促反应体系的反应速度是通过定量分析酪氨酸的生成量，即酪氨酸与福林试剂，在碱性条件下呈蓝色，通过在波长680nm处测定光密度值，从标准曲线求得酪氨酸的生成量。

[基本要求]

掌握测定碱性蛋白酶活力的原理及基本方法。

熟悉生物大分子生物学性质测定的技能。

实验四  生物大分子提取、分离、纯化及其生物学性质、理化性质（综合实验）

（48学时）

[基本内容]

生物大分子的提取、纯化、活力测定及理化性质的分析。

利用等电点沉淀或盐析等方法提取生物大分子，

利用离子交换层析、凝胶过滤层析，疏水层析、亲和层析等多种方法，逐步分离纯化生物大分子；跟踪检测蛋白质含量和纯度；纯化过程中跟踪检测活性。

利用电泳法检测纯度、分子量等理化性质。

[基本要求]    

掌握生物大分子的提取、分离纯化及相关性质测定的基本技能。培养从总体水平进行实验的设计，进一步加强并提高综合分析、解决问题能力；在科研工作中团结协作精神和勤俭而高效的科研作风。

三、学时分配表

1．张龙翔主编    《生化实验方法和技术》（第二版）  高等教育出版社      1997年

   2．王镜岩等主编  《生物化学》第三版                 高等教育出版社   2002年

   3．中山大学生物系编  《生化技术导论》           高等教育出版社         1997年

   4．Wiallian等著、王海云等译 《实用生物化学原理和技术》北京大学出版社    1997年

制定单位: 生物化学与分子生物学教研室

执笔人:   刘岩峰

审核人:   张嵘