槐米中芦丁的提取和精制()实验报告

1.制备芦丁, 供药用.

2.通过芦丁的制备, 掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和把持.

3.熟悉重结晶技巧.

4.了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法.

（二）实验的基来源根基理

1.芦丁的提取原理

利用芦丁结构中含有多个酚羟基, 呈酚酸性, 能在碱水中溶解的性质, 可用碱性溶剂进行提取, 提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）.也可利用芦丁在冷水中溶解度小, 在热水中溶解度年夜的性质进行提取.

利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小, 在热乙醇中溶解度年夜, 以及在热水中溶解度年夜, 在冷水中溶解度小的性质分离.芦丁用溶剂加热溶解后, 趁热抽滤, 滤液放冷后能析出而到达分离的目的（如不纯可再重复把持进行分离）.也可采纳醇溶水沉法进行精制.

（1）利用吸附薄层色谱的分离原理, 芦丁与芦丁对比品在同一条件下进行展开, 显色, 以到达鉴定芦丁的目的.

（2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应）, 确定芦丁的成份类型（黄酮类）.

(三)实验内容

1.用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁.

酸沉法和冷却过饱和法分离芦丁.

3.溶剂重结晶精制芦丁.

(四) 实验药材仪器与试剂

1. 实验药材 槐米20g.

2. 仪器：磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、500ml烧杯, 1000ml烧杯, 50ml烧杯, 250ml园底烧瓶、500ml园底烧瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml锥形瓶、50ml锥形瓶、研钵、移液管、减压过滤装置, 布氏漏斗, 抽滤瓶、层析缸等.

3.试剂：硼砂、氧化钙、 HCI、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸、PH试纸等.

（五）实验步伐

1.提取（水提取法）

称取槐米粗粉20g, 在研钵中研碎后放入500ml烧瓶中, 加水200ml, 用磁力加热搅拌器加热煮沸30min, 趁热过滤.残渣同法把持一次, 合并两次滤液, 放置冰箱中析晶, 待全部析出后, 减压抽滤, 用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶, 抽干, 得粗制芦丁, 干燥, 称重, 计算得率.

2.精制（醇-水重结晶法）

取粗制芦丁1g, 置于250ml园底烧瓶中, 加80%乙醇30ml加热回流15分钟, 趁热抽滤.滤液置250ml烧杯中, 向滤液中加蒸馏水（约3~4倍量）至溶液呈明显混浊, 室温放置, 抽滤得精致芦丁.用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶, 晾干, 称重.

(六) 过程与现象记录

Day 1 （2011-05-07）

1.提取

①称取研碎的粗槐米20.02g, 组装仪器.

②原料放入500mL烧瓶中加水200mL（1-2）, 磁力搅拌加热.烧瓶中为咖啡色悬浮液, 有甘苦气味, 沸腾前不竭发生小气泡上, 液体中有明显漩涡（1-3）.102℃沸腾, 发生年夜量气泡, 药渣翻滚, 漩涡被气泡遮盖（1-4）.加热过程中时常停止沸腾, 续略升温2~3℃.随着时间的延长, 液体颜色加深.煮沸规程中应控制液量, 过少难以提出药品, 过多容易喷出瓶口.

③最初用抽滤法分离残渣（1-5）, 可是溶液很稠且含糖分较多, 难以流下（1-6）, 而且易阻塞和打破滤纸, 还渐渐冷却.后改用离心法, 5000r,15min(1-7), 效果略好, 可是溶液还是冷却, 溶解的提取物较少.滤液为深黄色色, 粘稠, 气味浓厚甘甜.

④再次将滤渣至于放入500mL烧瓶中加水200mL磁力搅拌加热30min, 液体颜色略比第一次深.

⑤将两次获得的浸液（约300mL）收集放入冰箱备用.

Day 2 （2011-05-08）

2．精制

1.将粗提物抽滤（1-7）（1-8）（1-9）, 干燥得粗制芦丁（1-10）.

2.取粗制芦丁1.008g, 置于250ml园底烧瓶中, 加80%乙醇30ml, 加热回流15分钟（1-11）, 加热前没有充沛分散固体粗提物, 趁热抽滤（1-12）, 获得黄色油状液体（1-13）.

2.另旋转蒸发粗提物的滤液（1-14）, 没有产物.

Day 3（2011-05-14）

3.鉴定

（1）点滴显色反应   从放置一周的粗提物中取芦丁的甲醇溶液（供试液）分别点在滤纸上, 挥去溶剂, 紫外照射, 光吸收明显（1-15）, 然后分别添加供试液芦丁的甲醇溶液和显色剂2%三氯化铝乙醇溶液, 显黄色（1-16）, 在紫外灯下λ365nm观察有明显亮斑（1-17）.

（2）薄层色谱鉴定

吸附剂：硅胶GF254薄层板（5.0cm X 10.0cm）.

样  品：自制芦丁（用甲醇溶解, 浓度约1mg/ml）

对比品：芦丁对比品的甲醇溶液.

展开剂：三氯甲烷-甲醇-甲酸（7∶3∶0.5）

显  色：a.先在可见光下观察, 然后在紫外光下观察, 有明显紫外吸收.（365nm紫外灯下观察）

b.遮挡硅胶板左侧喷三氯化铝试剂（1-18）, 365nm紫外灯下观察, 右侧有显色剂呈黄色, 左侧有明显紫外吸收（1-19）.

4 .注意事项

(1) 硼砂因能与芦丁中的邻二酚羟基结合, 起呵护邻二酚羟基, 不被氧化破坏的作用.实验证明, 提取时加入硼砂, 产物的质量会好些.

(2) 石灰乳既能到达碱溶解提取芦丁的目的, 还可以除去槐米中年夜量的粘液质和酸性树脂（形成钙盐沉淀）, 但PH不能过高和长时间煮沸, 因为会招致芦丁的水解而开环和形成钙鳌合物, 影响产物的质量和产率.

(3) PH过低（酸性太强）会使芦丁形成洋盐而收率降低.

(4) 称量芦丁时, 先将带滤纸的漏斗称重, 再将盛样品的带滤纸的漏斗称重, 差重即为样品的重量.

（七）结果计算及分析

产率

产率=（0.51/1.008）×100%=50.60%

比移值

分析：1、水提法不能充沛溶解芦丁；

      2、精制时粗提物聚集成固体颗粒, 没有充沛溶解；

      3、抽滤、转移等过程的损失.

（八）心得体会

第一次做这样长时间的实验, 渐渐喜欢上了实验室这样宁静的气氛, 在这里做实验, 只需要关注把持和实验过程, 思考、分析反应机理和获得某个结果的原因, 不需要考虑实验之外的那些世俗和喧嚣.

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