血凝抑制实验常出现的错误

一、原理

病毒能够与鸡红细胞发生凝集现象，这种红细胞凝集现象可被特异性免疫血清所抑制，即红细胞凝集抑制实验（HI）。

二.应用

由于血凝反应可被特异性抗体所抑制，抗体与病毒结合后，血凝素不能吸附于红细胞表面的受体上，因此血凝抑制实验可以用于：

1.检测血清中的抗体水平。

2.鉴定病毒。

3.辅助诊断病毒性疾病。

4.作为适时免疫的辅助手段，能避免免疫失败、免疫空挡及重复免疫造成的损失。

三、HA、HI实验结果示意图

                       HA、HI实验示意图

A、C：HA实验：凝集到第9孔；凝集价512

B、D：HI实验：抑制到第6孔；抗体水平6个滴度

四、HI实验易出现的错误

1、对照孔凝集（如图1）

1盐类凝集：所谓盐类凝集即稀释液中氯化钠达至一定高浓度时，即使没有血清抗体也能发生凝集反应。

2当生理盐水被细菌污染时也可出现对照孔凝集。

3血清变质或受细菌污染。

                        图（1）

2、全部凝集（如图2）

1当红细胞受细菌污染或保存时间过长可出现此现象。

2抗原滴加时出现失误，工作抗原效价过高。

3生理盐水受细菌污染或其它因素.

                         图（2）

3、红细胞全部下滑（如图3）

 ①当配制抗原时，配制工作抗原效价过低，不足以凝集鸡红细胞。

 ②加样时所有孔全部加成生理盐水亦出现下图现象。

                          图（3）

4.工作抗原效价过高或过低对结果都有一定的影响。过高，测定抗体效价偏低；过低，测定效价过高，甚至很高。（见图4）

                      图（4）同一血清

A为工作抗原效价过低，第12孔抗原对照孔没有100%凝集，这样测定抗体就过高（211以上）

B为正确的工作抗原效价对照，实际抗体为28

C为工作抗原效价过高，测定抗体偏低，为25

5.不同来源、不同浓度的红细胞会使结果差异很大，所以红细胞来源一定要相同：

      一般需要3只或3只以上公鸡来提供红细胞，将3只以上公鸡红细胞混合在一起。也可由1只公鸡来提供红细胞，但必须经临床多次使用证明是可行的。有抗体鸡提供的红细胞需要更多次数洗涤。但要注意有时不同的公鸡提供的红细胞对禽流感H5亚型抗体测定，效价差异很大。不同浓度的红细胞对抗体测定也有影响。

6.温度对实验结果也有影响，一般要求在室温25-37℃进行实验，当实验温度低于4℃时红细胞有时会发生自凝现象。

7.抗原与抗体作用时间过长或过短对结果影响较大：过短出现凝集不完全；过长出现洗脱现象。    

8.96孔V型板是否洗净，是否光滑也会影响实验结果。

以上所述都是平时操作中容易出现的错误，所以进行实验时一定要严格操作，每次测定应有严格的温度范围和作用时间，出现错误时要认真查找原因，以免类似错误再次出现。另外，所用抗原应是稳定性好，效价高的浓缩抗原。