液相色谱期间核查规程 参照JJG705-2014

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1.核查目的

为使高效液相色谱仪运行正常，确保检验数据的准确、可靠，特制订本规程。

2.适用范围

适用于高效液相色谱仪紫外-可见光检测器、二极管阵列检测器、荧光检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器在两次检定之间的运行检查。

3.核查依据

高效液相色谱仪使用说明书

JJG705-2014《液相色谱仪检定规程》

4.环境条件

检测室内室温应在15～30℃，相对湿度20%～85%。

室内无强烈的机械振动和电磁干扰。

5.核查内容及方法

5.1外观检查

5.1.1仪器名称、型号、制造厂名、产品系列号、出厂日期等标牌内容齐全。

5.1.2检查仪器电源线、信号线等插接紧密，各开关、旋钮、按键等功能正常，指示灯灵敏，显示器清晰。

5.1.3检查贮液器是否清洁，检查吸滤头是否堵塞，若有堵塞现象，可先用异丙醇超声处理，然后再用甲醇或乙睛清洗干净。

5.1.4开启仪器各部分电源,检查泵、检测器、柱温箱，电脑主机与软件等运行状况是否正常。

5.2输液系统核查

5.2.1流量设定值误差SS和流量稳定性误差SR,，SS和SR应符合表1的要求。

表1 SS和SR的技术要求

按表1的要求设定流量，启动仪器，等压力稳定后，在流动相排出口用事先清洗称量过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确在5～10 min收集，称重。按(1)、(2)、(3)式计算SS和SR.

Fm=(W2-W1)/ρr·t           (1)

SS=︱F-FS︱/FS × 100%      (2)

SR=(Fmax-F min) /F × 100%     (3)

式中:

Fm:流量实测值，mL/min

FS:流量设定值，mL/min

W2:容量瓶+流动相的质量，g

W1:容量瓶的质量，g

ρr:实验温度下流动相的密度，g/cm3

t:收集流动相的时间，min

Fmax:同一组测量中流量最大值，mL/min

F min:同一组测量中流量最小值，mL/min

F: 同一组测量的算术平均值，mL/min

5.3检测器核查

●5.3.1紫外-可见光检测器和二极管阵列检测器

5.3.1.1基线噪声和漂移

选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流速为1.0mL/min,紫外检测器的波长为254nm，开机预热，待仪器稳定后记录基线30min,由检测器的衰减倍数和测得的基线峰-峰高对应的信号值，按公式（4）计算基线噪声，用检测器自身的物理量（AU）作单位表示。基线漂移用30min内基线偏离起始点最大信号值（AU/30min）表示。

Nd=KB                (4)

Nd - 检测器基线噪声

K - 衰减倍数

B - 测得的基线峰-峰高对应的信号值

5.3.1.2 最小检测浓度

选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流速为1.0ml/min,紫外检测器的波长为254nm，用微量注射器注入20uL的0.1ug/mL(1×10-7g/ml)萘-甲醇溶液，记录色谱图，由色谱峰和基线噪声峰-峰高，按式（5）计算最小检测浓度CL。

CL=2NdCV/20H          (5)

CL - 最小检测浓度，g/ml

Nd  - 基线噪声峰-峰高,mm

H  - 标准溶液的色谱峰高,mm

C  - 标准溶液浓度, g/ml

V  - 进样体积,ul

5.3.1.3 定性、定量重复性核查

将仪器各部分连接好，选用C18色谱柱，以100%甲醇作为流动相，流量为1.0ml/min，检测波长为254 nm，基线稳定后注人20uL的100ug/mL (1×10-4g/mL)萘-甲醇标准溶液，连续自动进样6次。

要求：定性重复性误差6次测量值的RSD应小于或等于1.0%；定量重复性误差6次测量值的RSD应小于或等于3.0%。

●5.3.2荧光检测器

5.3.2.1基线噪声和漂移

将仪器各部分连接好，选用C18色谱柱，以100%甲醇作为流动相，流量为1.0mL/min，激发波长选在290 nm，发射波长选在330 nm，仪器预热稳定后，记录基线30 min，根据检测器的衰减倍数和测得的基线峰一峰高对应的响应信号值，按式(4)计算基线噪声，用检测器自身的物理量(EU)做单位表示。基线漂移用30min内基线偏离原点的值（EU/30min）表示。

5.3.2.2 最小检测浓度

在5.3.2.1的色谱条件下，待基线稳定后由进样器注人20uL的0.1ug/mL( 1×10-7g/mL)萘-甲醇溶液，记录色谱图，按式(5)计算最小检测浓度。

5.3.2.3 定性、定量重复性核查

用100%甲醇作为流动相，流量为1.0mL/min，激发波长和发射波长分别为290 nm和330nm，基线稳定后注人20uL的10ug/mL（1×10-5g/mL）萘-甲醇标准溶液，连续自动进样6次。

要求：定性重复性误差6次测量值的RSD应小于或等于1.0%；定量重复性误差6次测量值的RSD应小于或等于3.0%。

●5.3.3示差折光检测器

5.3.3.1基线噪声和漂移

选用C18色谱柱，将仪器各部分联接好，以甲醇作为流动相，流量为1ml/min,参比池充满流动相，灵敏度选择在最灵敏挡，接通电源，待仪器稳定后记录基线 30min，根据检测器的衰减倍数和测得的基线峰一峰高对应的响应信号值，按式 (4) 计算基线噪声，用检测器自身的物理量(RIU)表示。基线漂移用30min内基线偏离原点的值（RIU/30min）表示。(实验中应特别注意，室温的波动不要超过 2 ℃)。

5.3.3.2 最小检测浓度

在5.3.3.1的色谱条件下，待基线稳定后由进样器注人20uL的5.0ug/mL甲醇中胆固醇溶液标准物质，记录色谱图，按式 (5) 计算最小检测浓度。

5.3.3.3 定性、定量重复性核查

示差折光检测器用100% 的甲醇为流动相，流量为 1.0 mL/min，灵敏度选在中间挡，注入20 uL 的200ug/mL（2.0×10-4g/mL）的甲醇中胆固醇溶液标准物质，连续测量 6 次。

要求：定性重复性误差6次测量值的RSD应小于或等于1.0%；定量重复性误差6次测量值的RSD应小于或等于3.0%。

●5.3.4蒸发光散射检测器

5.3.4.1基线噪声和漂移

选用C18色谱柱，将仪器各部分联接好，以甲醇作为流动相，流量为1ml/min,漂移管温度70℃，雾化气体流速为（2.5-3.0）L/min或适当的气体压力（280-350）kPa，灵敏度选择在适合的挡位，接通电源，待仪器稳定后记录基线 30min，根据检测器的衰减倍数和测得的基线峰一峰高对应的响应信号值，按式 (4) 计算基线噪声，用检测器自身的物理量(mV)表示。基线漂移用30min内基线偏离原点的值（mV/30min）表示。

5.3.4.2 最小检测浓度

在5.3.4.1的色谱条件下，待基线稳定后由进样器注人20uL的5.0ug/mL（5.0×10-6g/mL）甲醇中胆固醇溶液标准物质，记录色谱图，按式 (5) 计算最小检测浓度。

5.3.3.3 定性、定量重复性核查

 蒸发光散射检测器用100%甲醇作为流动相，流量为 1.0 mL/min，灵敏度选在中间挡，注入20 uL 的200ug/mL(2.0×10-4g/mL) 的甲醇中胆固醇溶液标准物质，连续测量 6 次。

要求：定性重复性误差6次测量值的RSD应小于或等于1.5%；定量重复性误差6次测量值的RSD应小于或等于4.0%。

6.核查结果处理

1、经核查合格的仪器可继续使用。

2、核查结果超出允许范围，应停止使用并申请维护修理、计量检定、执行本规程。

3、在每两次检定之间核查一次，出现异常情况或长期未用时核查，在大批量样品检验时核查。

7.期间核查记录表格

详见附页。

高效液相色谱仪核查记录