在HE染色过程中，分化、漂洗和复染是关键步骤，直接影响染色效果。分化的主要目的是褪去细胞质中的染色，使细胞核更加鲜明。将切片浸入1%盐酸乙醇液中，持续数秒至数十秒，直至切片颜色变红且颜色较浅即可。若染色效果不佳，分化步骤不可或缺；若染色适中，则可以省略此步骤。
漂洗则是将切片放入自来水中，使切片恢复蓝色。低倍镜检查时，细胞核应呈现蓝色，结构清晰；细胞质或结缔组织纤维成分应无色。之后，切片再放入蒸馏水中漂洗一次，确保切片完全干燥。
复染步骤中，使用0.5%伊红乙醇液对比染色2至5分钟。伊红主要染细胞质，其着色浓淡需与苏木精染细胞核的浓淡相协调。细胞核染色较浓时，细胞质也应浓染；细胞核染色较浅时，细胞质也应淡染。若需要，可在伊红乙醇液中加入数滴冰醋酸，以助细胞质着色，并防止染色经乙醇脱水时褪色。
通过上述步骤，可以确保染色效果统一且鲜明，提高病理图片的清晰度和准确性。
