感受态细胞的制备·转化·细胞转染·菌种培养相关方法及原理
来源：懂视网
责编：小OO
时间：2024-11-29 23:24:07
感受态细胞的制备·转化·细胞转染·菌种培养相关方法及原理
转化过程包括将连接产物加入感受态细胞中，在冰上放置30分钟，随后在42℃条件下加热90秒，之后在冰上放置2-5分钟。最后，将转化产物涂布在选择性培养基上进行筛选。对于细胞转染，这里以脂质体转染为例，使用六孔板进行操作。首先，在每个孔中加入200ul OPTI和5ul Lipofectin，静置5分钟。接着，向另一个孔中加入200ul OPTI和4ug质粒DNA，静置20分钟后将两部分混合。将混合液加入孔板中，4-6小时后更换培养基。值得注意的是，如果使用电转或病毒侵染进行转染，具体操作步骤可能会有所不同。在进行这些操作时，请确保遵循实验室安全规范，以保障实验人员的安全。详情。
导读转化过程包括将连接产物加入感受态细胞中，在冰上放置30分钟，随后在42℃条件下加热90秒，之后在冰上放置2-5分钟。最后，将转化产物涂布在选择性培养基上进行筛选。对于细胞转染，这里以脂质体转染为例，使用六孔板进行操作。首先，在每个孔中加入200ul OPTI和5ul Lipofectin，静置5分钟。接着，向另一个孔中加入200ul OPTI和4ug质粒DNA，静置20分钟后将两部分混合。将混合液加入孔板中，4-6小时后更换培养基。值得注意的是，如果使用电转或病毒侵染进行转染，具体操作步骤可能会有所不同。在进行这些操作时，请确保遵循实验室安全规范，以保障实验人员的安全。详情。
制备过程开始于将冻存的菌种按1:100的比例接种于3ml的LB液体培养基中，并在37℃条件下使用摇床进行过夜震荡培养。接下来，取1ml活化后的菌种接种到100ml的LB培养基中，继续在37℃摇床下培养1.5-2小时。随后，将菌种置于冰上10分钟，然后在4℃条件下以4000rpm的转速离心10分钟收集菌体。弃去上清后，使用事先冰浴处理过的0.1mol/L CaCl2溶液重新悬浮细胞，并在冰浴中静置30分钟。再次收集菌体，重复上述离心步骤。接着，在冰浴条件下加入0.1mol/L CaCl2溶液，随后将混合物分装保存，每份感受态细胞中加入40%甘油，使甘油终浓度达到20%。
转化过程包括将连接产物加入感受态细胞中，在冰上放置30分钟，随后在42℃条件下加热90秒，之后在冰上放置2-5分钟。最后，将转化产物涂布在选择性培养基上进行筛选。对于细胞转染，这里以脂质体转染为例，使用六孔板进行操作。首先，在每个孔中加入200ul OPTI和5ul Lipofectin，静置5分钟。接着，向另一个孔中加入200ul OPTI和4ug质粒DNA，静置20分钟后将两部分混合。将混合液加入孔板中，4-6小时后更换培养基。
值得注意的是，如果使用电转或病毒侵染进行转染，具体操作步骤可能会有所不同。在进行这些操作时，请确保遵循实验室安全规范，以保障实验人员的安全。详情
感受态细胞的制备·转化·细胞转染·菌种培养相关方法及原理
转化过程包括将连接产物加入感受态细胞中，在冰上放置30分钟，随后在42℃条件下加热90秒，之后在冰上放置2-5分钟。最后，将转化产物涂布在选择性培养基上进行筛选。对于细胞转染，这里以脂质体转染为例，使用六孔板进行操作。首先，在每个孔中加入200ul OPTI和5ul Lipofectin，静置5分钟。接着，向另一个孔中加入200ul OPTI和4ug质粒DNA，静置20分钟后将两部分混合。将混合液加入孔板中，4-6小时后更换培养基。值得注意的是，如果使用电转或病毒侵染进行转染，具体操作步骤可能会有所不同。在进行这些操作时，请确保遵循实验室安全规范，以保障实验人员的安全。详情。
