
酵母双杂交技术被用来检测特定蛋白质间的相互作用。这一过程包括:
1、构建诱饵蛋白表达载体,这种载体能将目标蛋白导入酵母细胞中。
2、验证表达载体在酵母中的转化效果,并检测自激活活性和毒性,以确保载体的安全性和有效性。
3、将诱饵蛋白质粒和猎物蛋白质粒共同转化酵母,验证两者在细胞内的相互作用,并生成相互作用检测报告。
4、当没有检测到相互作用时,通过Western blotting技术检测诱饵和猎物蛋白的表达情况,确保实验条件的正确性。
酵母双杂交技术有以下优点:
1、高效:转化方法简单,转化效率高,便于操作。
2、灵敏:能够检测蛋白质之间的微弱相互作用。
3、真实:酵母细胞是真核细胞,融合蛋白间的相互作用发生在真核细胞核内,经过翻译后的蛋白质修饰,多数能保持天然的空间构象和折叠状态,接近其真实的生理状态,一定程度上能反映细胞内的实际情况。
4、简捷:只需构建诱饵表达载体,可以省略蛋白质抽提纯化或抗体制备的繁琐步骤。