一、母种制作技术
通常处于保存期的大球盖菇菌种，其菌丝处于缓慢生长或停止生产状态。因此，在制作生产用母种之前，必须对保存的菌种进行复壮，以确保处于旺盛生长状态的菌种能够接入母种或原种培养基上，从而促进菌丝快速生长，获得粗壮、浓白、生长势旺的菌种。
1. 培养基配方
- I号：PDA（马铃薯200g、葡萄糖18g、琼脂18g、水1000ml）
- Ⅱ号：PDA+硫酸镁1.5g+磷酸二氢钾3g+蛋白胨2g、水1000ml
- Ⅲ号：马铃薯100g、干杂木屑100g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml
上述培养基配方需经高压灭菌20分钟后制成试管斜面，且3天内使用完毕。
2. 制作方法
通过组织分离技术，将选定的大球盖菇组织块接入I号培养基上（或接入需复壮的保存种）。在24-28℃条件下培养10-15天，当菌丝长至试管的1/3-1/4时，挑选菌丝扩展前端浓密、粗壮的部分转入Ⅱ号或Ⅲ号培养基上。采用两点接种法，使菌丝迅速长满培养基表面（一般15-20天），从而提高菌丝质量。经过Ⅱ号、Ⅲ号复壮培养基培养的菌丝表现为浓白、粗壮、生命力强，有利于原种菌丝的生长，缩短原种培养时间，提高成品率。
二、原种及生产种制作
1. 配方
- I号：小麦或大麦88%、米糠或麦麸10%、石膏或碳酸钙1%、石灰0.5%、含水量65%（加入米糠或麸皮主要是使培养基疏松，增加透气性，菌丝走向好）
- Ⅱ号：小麦25%、稻草64%、麦麸10%、石膏粉1%、含水量65%-70%
- Ⅲ号：杂木屑42%、杂刨木花42%、米糠或麦麸15%、硫酸镁0.2%、石膏或碳酸钙1%、含水量70%
以上配方在1.3-1.5kg/平方米压力下，消毒2-2.5小时，3天内使用完毕。
2. 原料选择和配制
实践证明，制作大球盖菇原种和生产种的最佳培养基主原料是麦粒，其次是木屑、刨木花，稻草最差。
- （1）麦粒的选择：应选择深黄或暗红色皮韧性大、浸泡时不易破皮的麦粒。从吸水率来看，大麦优于小麦。
- （2）浸泡：浸泡分为石灰水浸泡和清水浸泡预煮后加石灰两种方法。前者使用1%石灰水浸泡，pH值9-10，在25℃下浸泡8-9小时（大麦9-10小时），夏季水温高时应适当缩短时间。浸泡好的麦粒应具有较强弹性，指甲印很快消失。后者使用清水浸泡麦粒，时间与前者相同。浸泡后的麦粒需用清水冲洗后沥干，放入锅内煮至刚沸为止，然后冷却至室温，加入适量石灰调pH至6.5左右，含水量保持在65%。
- （3）装瓶及消毒：选用容积700ml，瓶口内径为3cm左右的浅白色耐高温玻璃瓶。将配好并混匀的培养料装入瓶中，每瓶装200-300g为宜。在1.3-1.5kg/平方米压力下进行消毒，时间为2-2.5小时。消毒时注意不要让麦粒呈糊状，以免影响透气性和养分，从而影响菌丝生长。
- （4）接种和培养：采取多点式接种，在瓶内培养料四周按适当距离接种3-4点，料面上再接种小块菌种。在24-28℃条件下暗培养7-10天，直至菌丝萌发生长至直径约4cm的菌斑时，立即对菌丝进行人工搅拌。搅拌时接种点的菌丝被搅断受刺激，同时开瓶口（在超净台上进行）实际上给菌丝提供了增氧作用，有利于菌丝迅速生长。一般整个培养过程需25-30天可长满瓶。
3. 生产种制作
- （1）配方、培养基制作、瓶子选择和消毒与原种相同。
- （2）接种：将长满瓶的原种接种到生产培养基表面上，尽量铺满料面，以避免杂菌污染。每瓶原种接不超过30瓶生产种。在24-28℃条件下培养7-10天，直至菌丝萌发生长至洁白、浓密粗壮时，对菌丝进行人工搅拌，搅断菌丝，刺激其快速生长。一般20-25天可长满全瓶。
