1. DNA的两条链具有相反的方向性，其中一条链是5'到3'的走向，而互补链则是3'到5'的走向。
2. 在引物退火之后，新合成的链方向为5'到3'。
3. PCR所用的酶具有一项特性，即只有在检测到上一个核苷酸配对完成之后，才能继续向下延伸。因此，只要引物的3'端碱基能够与DNA单链配对，无论5'端是否经过修饰，延伸过程都能够顺利进行。
4. PCR引物并不需要与模板完全互补，只要3'端的几个碱基能够配对，就可以触发反应。
5. 在PCR的第一个循环完成后，由上游引物扩增出来的链会与下游引物结合，这意味着即使引物经过了修饰，其修饰位点同样可以被扩增。
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