
1. CDS,即编码序列,在自然翻译过程中,生物体仅对CDS进行翻译。这意味着大多数蛋白质的CDS都以ATG(起始密码子)开头,并以TAG、TAA、TGA(终止密码子)结尾。
2. 在设计引物时,我们的目的是为了表达蛋白酶。因此,根据CDS设计引物即可。我可以肯定,这样做没有问题。
3. 在基因工程表达中,CDS上下游的序列通常是没有用的。请检查您公司设计的引物是否从CDS的两端开始设计。如果上游引物与CDS的前22个碱基能够匹配,那么上游引物就没有问题。
4. 如果您将来要用HIS*6标签进行纯化表达,您需要注意下游引物扩增的目的片段是否存在终止序列。如果存在终止序列,那么在表达时HIS*6标签无法与目的基因融合表达,这意味着您无法用镍层析柱对表达的蛋白进行纯化。