4×100米接力赛的规则涉及起跑、比赛过程、要求、场地与设施等方面，具体如下：
1. 起跑
起跑器是400米及以下径赛项目（包括4×100米和4×400米接力的第一棒）的必备设备。起跑器与起跑监视器相连，有助于发令员判断起跑是否犯规，以及确定哪些运动员犯规。
2. 比赛过程
在接力赛中，运动员必须在30米的接力区内后20米完成交接棒。判断“接力区内”的标准是接力棒的位置，而非运动员的身体或四肢位置。在4×100米接力跑中，第一棒全程及第二棒的第一弯道需分道跑，第二棒运动员需跑至抢道线后方可自由抢道。第一棒的传接必须在参赛者指定的跑道内进行，其余各棒的传接，裁判员根据第二及第三棒运动员通过200米起点处的先后，按次序让其第三及第四棒的队友在接力区内，由内至外排列等候接棒。
3. 要求
4×100米接力跑是分道进行的，接棒者可以在接棒区前10米内起跑。接力棒必须拿在手上，直到比赛结束。如果任何人掉了棒，必须由其本人拾回，且在不影响他人的情况下进行。所有接力赛事必须在接棒区内完成交接棒。若接棒者在传接棒完毕后故意越出跑道以妨碍其他参赛队伍，其队伍可能会被取消资格。
4. 场地与设施
比赛场地为标准的400米场地，内突沿外沿半径为36.5米。每条跑道宽1.22米（包含右侧分道线），分道线宽5厘米。跑进的方向为左手靠内场。分道编号应以左手最内侧分道为第1分道。即赛跑按逆时针方向进行，环形跑道从消局内向外依次是第1至第9号跑道。
现场观看4×100米接力赛时应注意以下事项：
1. 提前入座，以示对运动员的尊重，同时不影响他人观看比赛。
2. 运动员出场时，应给予鼓励和掌声，不仅针对本国的或自己喜欢的运动员，也应包括其他运动员。
3. 当运动员开始跳跃、投掷项目的助跑时，可以根据运动员的助跑节奏鼓掌，但应注意不要在看台上随意走动。
4. 比赛结束时，获胜运动员通常会绕场一周答谢观众，大家应该用掌声和欢呼声对其精彩表现表示欣赏和鼓励。
5. 爱护赛场环境，禁止吸烟，手机应关机或设置在振动、静音状态。
