
活细胞计数法,尤其是平板菌落计数法,是一种基于每个活细菌在培养基上形成一个菌落的原理设计的方法。通过取一定量的菌悬液进行一系列的倍比稀释,然后将定量的稀释液接种于平板上培养,根据培养基上生长的菌落数目,可以计算出样品中活菌的数量。这种方法的灵敏度较高,适用于检测污染活菌数,且被国际上许多国家采用。然而,在使用这种方法时需注意,一般选取菌落数在30~300之间的平板进行计数,过多或过少的菌落数均可能导致结果不准确。为了防止菌落蔓延,影响计数,可在培养基中加入0.001%的2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)。此外,这种方法仅适用于形成菌落的微生物,广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验,是最常用的活菌计数法。
比浊法则是通过测量菌悬液的透光量来间接测定细菌的数量。这种方法基于细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比,与光密度成正比的原理。通过使用光电比色计测定菌液的光密度(OD值),可以表示样品菌液的浓度。比浊法的优点在于操作简便快捷,但其应用范围受到,仅适用于检测含有大量细菌的悬浮液,并能给出相对的细菌数目。对于颜色过深的样品,该方法无法提供准确的测量结果。
活细胞计数法和比浊法各有优势和局限性。活细胞计数法能够提供准确的活菌数,但操作相对复杂,需要进行菌落计数;而比浊法则简便快捷,适合快速检测大量细菌的存在,但无法提供绝对的菌数,且对颜色深的样品适用性较差。两者结合使用,可以互补各自的不足,提高检测的准确性和效率。