半定量RT-PCR和定量RT-PCR的区别

半定量rt-pcr参照的做法一般有两种：
1)
将要比较的两个样品的beta-actin
调成一样的亮度，然后就可以直接比较目的基因的亮度了。方法的结果比较直观，但较费事。
2)
不进行调平，一个样品里将目的基因和beta-actin直接比较，用软件就可以做到，然后将不同样品的这个比值进行比较就可以了。方法比较简单，但结果不够直观。
1.每个标本都要做自己的内参，不能用同一个内参！
2.每个标本在实际做前都要摸最佳循环数，包括内参，但内参的循环数不一定要和目的基因一样，都要选择上升期的中间数作为最佳循环数，否则进入平台期就没有可比性了！所以内参要有它自己的最佳循环数！
3.电泳扫描后，计算灰度值，先用同一标本的内参和目的进行比较，然后用这个相对值再去和其他你所要比较的平行组进行比较，一般每组4个样本以上。这样就可以知道各组之间的差别了！