
在实验中,为了准确测量血浆中的丙二醛(MDA)含量,我们采用了一种特定的硫代巴比妥酸法。该方法通过一系列严格的步骤来确保结果的准确性与可靠性。首先,我们对试管进行编号,并将其分为标准管、标准空白管、测定管和测定空白管。随后,按照下表加入相应的试剂:
表2.1 血浆中丙二醛含量测定的步骤
试剂 标准管 标准空白管 测定管 测定空白管
10 ng/ml标准品(ml) 0.1 — — —
无水乙醇(ml) — 0.1 — —
测试样品(ml) — — 0.1 0.1
试剂一(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1
接下来,使用漩涡混匀器对试管进行混匀处理,并用保鲜薄膜封住试管口,然后用针头刺一个小孔。将试管置于95℃水浴中加热40分钟。加热完成后,将试管取出,用流水冷却,随后以4000转/分钟的速度离心10分钟,确保沉淀完全分离。
在比色步骤中,需要小心吸取上清液,使用移液器将上清液加入比色皿中,避免沉淀进入比色皿,影响吸光度的测量。将比色皿置于532纳米波长处,以1厘米光径进行测量,使用蒸馏水调零,读取各管的吸光度值。
最后,通过计算公式得出血浆中MDA的含量:血浆中MDA含量(ng/ml)=(测定管吸光度-测定空白管吸光度)/(标准管吸光度-标准空白管吸光度)×标准品浓度(10 ng/ml)×样品测试前稀释倍数。
此过程确保了实验结果的精确性和可靠性,为后续研究提供了可靠的数据支持。详情