
植物活性多糖的提取方法多样,除了传统的水提醇沉法,还包括酶解、微波、超声波、膜处理及二氧化碳超临界萃取等技术。其中,水提醇沉法因其操作简便且效果可靠,成为最为常用的方法。
水提醇沉法的具体操作步骤如下:首先准备所需的仪器、试剂和材料,包括电子天平、超声波清洗器、电热恒温水浴锅、抽滤设备、分光光度计等。试剂包括葡萄糖标准液、浓硫酸和蒽酮试剂。此外,还需要甜高粱和甘草作为实验材料。
接下来是葡萄糖标准曲线的制作。取7支大试管,分别加入不同浓度的葡萄糖溶液,每支试管加入蒽酮试剂4.0mL,迅速置于冰水浴中冷却,然后放入沸水浴中,盖紧管口,准确煮沸10分钟,取出后用冰浴冷却至室温,最后在620nm波长下测定吸光值。将标准葡萄糖含量(µg)与吸光值绘制成标准曲线。
植物样品中可溶性糖的提取过程是这样的:将样品粉碎并105ºC烘干至恒重,精确称取1~5g,置于50mL三角瓶中,加入沸水25mL,加盖超声提取10分钟。冷却后过滤,残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤,滤液收集在50mL容量瓶中,定容至刻度,得到可溶性糖的提取液。
稀释步骤是:从提取液中吸取2mL,置于另一50mL容量瓶中,以蒸馏水定容,摇匀。吸取1mL已稀释的提取液于试管中,加入4.0mL蒽酮试剂,平行进行三次测定。空白管则以等量蒸馏水代替提取液。
最后是结果处理:样品含糖量的计算公式为C × V总 × D / (W × V测 × 106) × 100%,其中C为标准曲线上查出的糖含量(µg),V总为提取液总体积(mL),V测为测定时取用体积(mL),D为稀释倍数,W为样品重量(g),106为将样品重量单位由g换算成µg的倍数。