bradford法测定蛋白质含量的原理是什么？应如何克服不利因素对测定的影响

Bradford法，也称考马斯亮蓝法，是通过蛋白质与考马斯亮蓝结合后产生的颜色变化来测定蛋白质含量。其基本原理是，亮蓝在电离状态下显示棕红色，与蛋白质结合后变为蓝色，吸收光峰在595nm处，吸光值与蛋白质含量成正比。反应快速，通常在2分钟内达到平衡，且试剂制备简单，操作简便，灵敏度高，是微克级蛋白质测定的理想选择。

然而，这种方法并非无懈可击。特殊蛋白的结构和缓冲液中的干扰物质可能会对测定结果产生影响。比如，对于特定的小分子碱性多肽如核糖核酸酶或溶菌酶，以及去污剂浓度超过0.2%的情况，如TritonX-100、SDS、NP-40等，Bradford法可能无法提供准确的定量。因此，实施时需确保样本的特性和实验条件符合该方法的要求。

测定过程包括配制Bradford浓染液，准备标准曲线（选择性质相近的蛋白质样本），将待测样本与缓冲溶液混合，稀释染料结合溶液，让样本与染料反应并测定吸光度，最后通过标准曲线计算蛋白质浓度。该方法在大多数情况下都能提供精确的定量结果，但使用前需充分理解其适用范围和潜在影响因素。