实验三 薄层色谱

一．实验目的要求

1．学习薄层色谱分离原理及方法。

2．学习薄层色谱的基本操作技术。

3．掌握手工涂布、薄板活化、点样、展开、显色等基本操作。

二．实验原理

薄层色谱属于固—液吸附色谱。样品在涂在玻璃板上的吸附剂（固定相）和溶剂（移动相，又称展开剂）之间进行分离。由于各种化合物的吸附能力各不相同，在展开剂上移时，它们进行不同程度的解吸，从而达到分离的目的。

比移值(Rf值)：是表示色谱图上斑点位置的一个数值，他可用下式计算：Rf=a/b。

图3—1 色谱中斑点位置鉴定图3—2直立式展开

式中：a—溶质的最高浓度中心至样点中心的距离；

b—溶剂前沿至样点中心的距离。

良好的分离，Rf值应在0.15～0.75之间，否则应该调换展开剂重新展开。

三．实验步骤

1．吸附剂

薄层色谱的吸附剂最常用的是硅胶和氧化铝，其颗粒大小一般为260目以上。颗粒太大，展开时速度快，分离效果不好；反之，颗粒太小，溶剂移动太慢，斑点不集中，效果也不理想。吸附剂的活性与其含水量有关，含水量越低，活性越高。化合物的吸附能力与分子极性有关，分子越强，吸附能力越大。

国产硅胶：硅胶G、硅胶H＆硅胶F254，后者使用之后可在紫外灯下观察，有机化合物在亮的荧光板上盛暗色斑点。硅胶常用于湿法铺层。

本实验用硅胶G

2．展开剂选择

薄层色谱展开剂的选择，主要根据样品中各组分的极性、溶剂对于样品中各组分溶解度等因素来考虑。展开剂的极性越大，对化合物的洗脱力也越大。

选择展开剂时，除参照资料提供的溶剂极性来选择外，更多地采用试验的方法，在一块薄层板上进行试验：

①若所选展开剂使混合物中所有的组分点都移到了溶剂前沿，此溶剂的极性过强；

②若所选展开剂几乎不能使混合物中的组分点移动，留在了原点上，此溶剂的极性过弱。

当一种溶剂不能很好地展开各组分时，常选择用混合溶剂作为展开剂。先用一种极性较小的溶剂为基础溶剂展开混合物，若展开不好，用极性较大的溶剂与前一溶剂混合，调整极性，再次试验，直到选出合适的展开剂组合。合适的混合展开剂常需多次仔细选择才能确定。

本实验用的展开剂为：丁醇：乙醇：水＝9：3：1（体积比）

3．实验操作步骤⑴制板 取20cm×10cmde 玻璃板的玻璃板（经常使用显微镜上的载玻片），依次用水和乙醇洗净，晾干。取5g薄层色谱用的硅胶G，加5％CMC溶液约10mL调成糊。调制时慢慢搅拌，勿使产生气泡。将糊倒在玻璃板上，摇动摊平，室温晾干（或用冷风吹干），置于105～110℃烘箱内进行活化30min。活化好的板放在干燥器内冷却、保存备用。

⑵点样 圆珠笔芯在点滴板上摩擦，然后用乙醇将残留在点滴板上的油溶解，用毛细管蘸取试样溶液，在薄层板上点样。在样点上轻轻画出一条平行于玻璃板底边的细线。薄层色谱板载样量有限，勿使点样量过多。

⑶展开 吹干样点，竖直放入盛有展开剂的有盖展开瓶中。展开剂要接触到吸附剂下沿，但切勿接触到样点。盖上盖子，展开。待展开剂上行到一定高度（本实验的展开高度为

4.5cm），展开时间约35min。取出薄层板，再画出展开剂的前沿线。

⑷显色，计算R f值 挥发干展开剂，选择合适的显色方法显色（本实验不显色）。量出展开剂和各组分的移动距离，计算各组分的相对移动值

四．注意事项

1．制版前必须洗净玻璃板，擦干。

2．吸附剂调制成流线状，而且应现调现用，硅胶G糊易凝结，不宜久放。

3．手工涂布应尽量涂匀，不能涂太厚。