替加环素体外药敏试验操作规程专家共识

。指南与共识．替加环素体外药敏试验操作规程专家共识

王辉俞云松王明贵胡云建胡志东曹彬倪语星马越任健康罗燕萍褚云卓廖康

替加环素是一种甘氨酰环素类抗生素，于２００５年在美国批准上市，全球共有５０多个国家和地区批准和上市了替加环素，２０１２年初在中国批准上市。目前批注的适应证：（１）复杂性皮肤和皮肤软组织感染；（２）复杂性腹腔内感染；（３）社区获得性细菌性肺炎。由于替加环素具有广谱、抗菌活性强的特点，对于临床常见多重耐药菌感染有非常好的疗效，且临床使用方便，不需根据肾功能受损情况调整剂量，因此该抗菌药物将会在临床抗感染治疗中被广泛使用。美国食品药品监督局（ＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ＦＤＡ）和欧洲药敏试验委员会（ＥｕｒｏｐｅａｎＣｏｍｍｉｔｔｅｅｏｎＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＳｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙＴｅｓｔｉｎｇ，ＥＵＣＡＳＴ）分别制定了替加环素体外药敏检测的操作指南和结果判定标准，由于我国采用的美国临床和实验室标准协会（ＣｌｉｎｉｃａｌａｎｄＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｔａｎｄａｒｄｓＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＣＬＳＩ）标准中尚无替加环素体外药敏检测的操作指南和结果判定标准，因此在２００９年ｌ１月的《中华检验医学杂志》上发表的专家共识——《新型甘氨酰环素类抗菌药物替加环素的体外药敏试验的操作规程》ｕＪ，为我国替加环素的体外药敏检测提供了重要参考和指导。随着替加环

ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００９－９１５８．２０１３．０７００４

基金项目：国家自然科学基金（３１１７０１２５）；高等学校博士学科点专项科研基金（博导类）课题（２０１１０００１１１００４３）

作者单位：１０００４４北京大学人民医院检验科（王辉）；浙江大学医学院附属邵逸夫医院感染科（俞云松）；上海华山医院抗生素研究所（王明贵）；上海交通大学医学院附属瑞金医院临床微生物科（倪语星）；中国食品药品生物制品检定研究院（马越）；陕西省人民医院检验科（任健康）；中华医学会中华检验医学杂志编辑部（韩锟）；广州医学院呼吸病研究所（卓超）；中国医学科学院北京协和医院检验科（徐英春）；卫生部北京医院检验科（胡云建）；天津医科大学总医院检验中心（胡志东）；首都医科大学附属北京朝阳医院感染和微生物科（曹彬）；中国人民总医院微生物科（罗燕萍）；中国医科大学附属第一医院检验科（褚云卓）；中山大学附属第一医院检验科（廖康）；四川大学华西医院检验科（康梅）；北京航空总医院检验科（张冀霞）

通信作者：王辉，电子信箱：ｗｈｕｉｂｊ＠１６３．ｔｏｎｉ韩锟卓超徐英春

康梅张冀霞

素的上市使用，临床实验室需要广泛开展替加环素的体外药物敏感性检测，指导临床正确使用；然而替加环素易氧化降解，理化性质不稳定，导致该药的体外药物敏感性检测存在较多的难点和操作误区，不易标准化。为使临床实验室替加环素的体外药物敏感性检测简便易行，不同实验室、不同时期的药敏检测结果具有可比性，必须统一替加环素体外药敏检测条件和方法，保证体外药敏检测结果与临床需求之间的匹配度。

一、替加环素的抗菌谱和理化性质

替加环素为超广谱抗菌药物，其抗菌谱覆盖革兰阳性菌、革兰阴性菌、厌氧菌。革兰阳性菌包括：金黄色葡萄球菌（包括甲氧西林耐药株）、凝固酶阴性葡萄球菌（包括甲氧西林耐药株）、肠球菌属（包括万古霉素耐药株）等；革兰阴性菌包括：大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、弗劳地柠檬酸杆菌等肠杆菌科细菌，流感嗜血杆菌、鲍曼不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌；厌氧菌包括：脆弱拟杆菌、多形拟杆菌、单形拟杆菌、普通拟杆菌、产气荚膜梭菌和消化链球菌等。替加环素理化性质活泼，含多酚基团，易氧化降解，或形成差向异构体，不宜在光线及空气中久置，否则会导致替加环素有效抗菌活性的降低，直接影响检测结果。

二、替加环素的质控范围和折点判定

虽然目前ＣＬＳＩ没有替加环素的药敏结果判定标准，但却给出了常见质控菌株ＭＩＣ和抑菌圈的可接受范围，见表１。ＦＤＡ和ＥＵＣＡＳＴ中替加环素的折点有所差异，主要差别在于革兰阴性杆菌，同时抑菌圈直径的结果解释的判定标准也不同，见表２。

如果微生物室采用自动化仪器进行替加环素的药敏试验，应当注意检测系统可能存在的不同判定标准。

三、替加环素的体外药敏检测方法

（一）培养基

目前可用于药敏检测的培养基有ＢＢＬ（美国ＢＤ公司）、Ｄｉｆｃｏ（美国ＢＤ公司）、Ｏｘｏｉｄ（英国Ｏｘｏｉｄ公司）、Ｉｓｏ．Ｓｅｎｓｉｔｅｓｔ（英国Ｏｘｏｉｄ公司）、ｂｉｏ．Ｍｅｒｉｅｕｘ（法国生物梅里埃公司）、Ｍｅｒｃｋ（德国Ｍｅｒｃｋ公司）。培养基中锰元素含量过高会使替加环素的体外药敏检测结果升高ｂ１，目前国内常用的ＢＢＬ和Ｏｘｏｉｄ培养基中锰元素含量低于国外报道的影响替加环素体外药敏检测的浓度，不影响替加环素体外药敏检测结果∞ｊ，因此，专家组认为ＢＢＬ和Ｏｘｏｉｄ培养基均可用于替加环素体外药敏检测。

表１替加环素药敏试验中各种质控菌株可接受的

质量控制范围‘２１

注：８琼脂稀释法；“一”示无相应标准

隔夜存放的替加环素ＭＨ琼脂会使检测结果升高［６］，预先配制好的ＭＨ肉汤较ＭＨ琼脂更容易溶解氧［９］，导致替加环素氧化失活，使检测结果升高。因此，专家组认为检测替加环素体外药敏时，必须使用当天新鲜配制的培养基。

（二）检测方法

１．稀释法：稀释法包括琼脂稀释法和肉汤稀释法。母液的配制和稀释方案应参照ＣＬＳＩＭ１００－￥２２指南进行¨ｊ。（１）肉汤稀释法：ＣＬＳＩ推荐采用肉汤稀释法检测普通分离快速生长的需氧菌或兼性厌氧菌的敏感性，目前被认为是检测替加环素体外药物敏感性的金标准。肉汤稀释法包括微量肉汤稀释法和宏量肉汤稀释法，两种方法的检测原理一致。但肉汤稀释法不适用于厌氧菌体外药敏检测。（２）琼脂稀释法：琼脂稀释法是临床体外药敏检测中很成熟的一项技术，该方法不仅可用于非苛养菌、需氧菌和兼性厌氧菌检测，还可用于厌氧菌，因此临床应用非常普遍。但琼脂稀释法检测替加环素某些菌种的体外药物敏感性时，检测结果略高于肉汤稀释法㈣。

２．Ｅｔｅｓｔ＠（ＡＢＢｉｏｄｉｓｋ）：Ｅｔｅｓｔ试验条是采用惰性无孔塑料条，该试验条的一面标有ＭＩＣ刻度（ｍｇ／Ｌ），另一面含有预设的干燥、稳定、连续浓度梯度的抗菌药物。Ｅｔｅｓｔ方法也可用于快速生长需氧菌和厌氧菌的ＭＩＣ检测。但Ｅｔｅｓｔ法检测不动杆菌ＭＩＣ值高于肉汤稀释法检测结果，尤其是ＭＩＣ值在２—４ｍｇ／Ｌ范围内时，容易出现假耐药一’１引。

３．ＭＩＣ测试条（ＭＩＣＴｅｓｔＳｔｒｉｐ，ＭＴＳ）：是一种类似于Ｅｔｅｓｔ测试条的ＭＩＣ检测试条，是一种可渗透性的专用纸条，该测试条与Ｅｔｅｓｔ测试条一样，一面标有ＭＩＣ刻度（ｍｓ／Ｌ），另一面含有预设的、干燥、稳定、连续浓度梯度的抗菌药物。ＭＴＳ也可用于厌氧菌对替加环素ＭＩＣ的检测。ＭＴＳ检测替加环素的体外药物敏感率与肉汤稀释法具有很好的一致性，同时由于该方法操作简便，适用于单个样本的检

表２替加环素的抑菌圈直径和ＭＩＣ药敏判定标准

注：ａ当前不存在耐药分离株，因此ＦＤＡ无耐药和中介的折点。对于ＭＩＣ结果提示为“非敏感”范畴的分离株应采用参考方法进行确证。“替加环素的体外抗摩根菌属、变形菌属和普罗威登斯菌属的活性有所降低。琼脂稀释法；。参考文献为‘４］；“Ｓ”示敏感，…Ｉ’示中介，“Ｒ”示耐药；“ｎ／ａ”示不适用；“一”示无相应标准

替加环素体外药敏试验操作规程专家共识

作者：王辉， 俞云松， 王明贵， 倪语星， 马越， 任健康， 韩锟， 卓超， 徐英春

作者单位：王辉(100044,北京大学人民医院检验科)， 俞云松(浙江大学医学院附属邵逸夫医院感染科)， 王明贵(上海华山医院抗生素研究所)， 倪语星(上海交通大学医学院附属瑞金医院临床微生物科)， 马越(中国

食品药品生物制品检定研究院)， 任健康(陕西省人民医院检验科)， 韩锟(中华医学会中华检验医学杂

志编辑部)， 卓超(广州医学院呼吸病研究所)， 徐英春(中国医学科学院北京协和医院检验科)

刊名：

中华检验医学杂志

英文刊名：Chinese Journal of Laboratory Medicine

年，卷(期)：2013,36(7)

本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zhyxjy201307004.aspx