类黄酮测定方法

3.4.1 测定方法依据　以芦丁为对照品测定样品中类黄酮的含量，加入铝离子试剂，使类黄酮化合物与铝盐形成稳定的络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。

3.4.2 波长的选择　取样品液适量，在0.50 mL 5%亚钠溶液存在的碱性条件下，经铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700 nm 波长范围扫描，测得络合物最大吸光度为502 nm，如图2，故测定时选用此波长。

图2 类黄酮在420～700 nm波长下的吸光度

3.4.3 标准曲线的绘制　

分别精密吸取芦丁对照液(0.10 mg/ mL) 0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 mL 于10.00 mL 容量瓶中，加入5%亚钠溶液0.50 mL，摇匀，静置6 min，再加10%铝溶液0.50 mL，摇匀,静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 mL，用60%乙醇定容，摇匀，静置12 min，以试剂作空白参比液，于502 nm 处测吸光度。测定结果如图3：

y = 19.42x - 0.0079

R

2

 = 0.9998

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

0

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

0.06

类黄酮的浓度mg/mL

吸光度(A)

图3  类黄酮标准曲线