果蝇的性别鉴定,性状观察及饲养方法

摘要：了解果蝇在遗产学历史上的重要地位、果蝇的麻醉方法及观察不同突变体的表现型、学习果蝇的性别鉴定、果蝇培养基的制作、了解果蝇的培养方法。

1.引言

进一步了解、掌握模式动物—果蝇实验中的基本操作：如何饲养果蝇、最适环境因子、生活周期和生殖特性；理解果蝇的生活史、生殖特性；学会分辨雌雄；认识几种基本性状、并掌握果蝇的麻醉技术、处女蝇的筛选。

2.实验材料

2.1 试验材料

2.1.1观察所用材料：

体式显微镜、白色塑料板、小毛笔、解剖针、麻醉瓶、培养皿、棉花、麻醉剂乙酸乙酯、尸体盛留器、野生型果蝇及突变体原种

2.1.2培养所用材料

生化培养箱、高压蒸汽灭菌锅、培养瓶

配制培养基用品：玉米粉、蔗糖、酵母粉、丙酸、琼脂、水、电磁炉、钢精锅、玻璃棒、小烧杯

2.2试验方法及结果

2.2.1果蝇是遗传学分析的好材料

生长迅速，生活史较短，短时间内可获得大量子代；

容易饲养，在常温下以玉米粉做饲料就可使之生长繁殖；

染色体数目少，加之唾腺染色体巨大，是细胞学观察的好材料；

突变性状多，且多数是形态突变，便于观察。

2.2.2 果蝇生活史的观察

卵：雌雄果蝇羽化后12小时内不能交配，

所以选处女蝇要利用这12小时。超过12小

时开始交配，2天后开始产卵，每只雌果蝇

一生中可产卵400—500枚，卵长0.5mm，

椭圆形，端部两侧各具一纤丝。

幼虫：受精卵经1-2天孵化（25℃时12小

时开始孵化），经4-5天2次蜕皮，成为3

龄幼虫，体长可达4-5mm。

蛹：3龄幼虫爬上培养瓶内壁化蛹，蛹梭形、由淡黄至黄褐色。

成虫：蛹期约4天开始羽化，一般傍晚羽化的数量比黎明的多。刚羽化的成虫体较大。色较淡、翅还未展开、体表较软。

2.2.3果蝇的麻醉及观察方法

对果蝇进行检查时，可用乙醚或乙酸乙酯麻醉，使它保持静止状态,作种蝇以轻度麻醉为宜（选乙醚）;做观察可用乙酸乙酯深度麻醉致死。麻醉过度的孤影翅膀外展，与身体垂直。

麻醉时将麻醉剂（2－3滴）滴到麻醉瓶塞的绵球上（注意不要让麻醉剂流到瓶内），同时麻醉瓶要保持干燥，否则会粘住果蝇翅膀。

轻拍培养基瓶壁，让果蝇震落到培养基上。如瓶塞上附着果蝇，则稍稍晃动瓶塞，让他们落到培养基上。然后打开麻醉瓶和培养瓶塞，迅速将两者瓶口相接（麻醉瓶在上，培养瓶在下），轻拍培养瓶壁使果蝇落入麻醉瓶中，迅速盖好两个瓶塞，并倒置麻醉瓶，几分钟后果蝇即处于昏迷状态。

麻醉后的果蝇放在白瓷板上，用毛笔轻轻拨动进行观察。必要时可进行第二次麻醉。观察完毕后倒入死蝇盛留器中。

2.2.4果蝇的雌雄鉴别

大小：雌体通常比雄体大

形态：雌体腹部稍尖，较宽厚呈卵圆形；

雄体腹部钝圆，相对窄小呈柱状。

条纹：雌体腹部背面有宽窄相近的5条

黑色条纹；雄体腹背只有3条，

上部两条窄，最后1条宽且延伸

至腹部腹面，呈一明显黑斑。

性梳：果蝇胸足跗节共有5个亚节。雄

蝇第一对胸足跗节的第一亚节基

部有一梳状黑色鬃毛结构，及为

性梳。放大100倍左右可看清这

一结构。雌蝇没有性梳。

性梳时间别雌雄共有的可靠标志。观察腹部腹面末端外生殖器结构也是分辨雌雄的简单的、可靠方法。雄蝇外生殖器色深，雌蝇色浅。

2.2.5突变形状的观察

三隐 平衡棒 三隐 野生 黑檀体

残翅 性梳（三隐） 2.2.6果蝇的培养 培养基的制备：

计算所需培养基及培养瓶的数量 培养瓶的灭菌 培养基的配置

量取1000mL 水，一半倒入锅中，加入琼脂加热溶解。水开后加入蔗糖，搅拌均匀。然后将玉米粉加到剩余的水中，搅拌均匀，沿着锅边慢慢倒入，边倒边搅拌。继续煮几分钟，培养基成为糊状物时即可离火。加入丙酸以及酵母粉，搅拌均匀即可用洗净的小烧杯分

果蝇的培养基通常不需要灭菌。培养基在室温下干燥1~2天，待其表面完全凝固后使用，表面太软将黏住果蝇致其死亡。培养基令却后，水蒸气常凝成水珠挂在瓶壁上，对于小培养瓶，这些水分易于蒸发，1~2天内自然干燥。

培养基不能久存，最好在一个星期内使用。

果蝇的培养

25℃是果蝇最适生长温度，此温度下果蝇活力强；30℃以上的高温则可能致死；在10~20℃环境中生活周期延长：低于10℃则可能影响生活力。利用此特性可调节果蝇生长，控制群体大小。

原种培养每2~4周换一次培养基，每一原种至少保留两套。如果确认果蝇没有混杂，同事群体没有感染螨虫，可直接将新旧培养瓶对接，不需要麻醉，直接转移果蝇。反之，则在接种前先麻醉果蝇。检查有无混杂，有无螨虫（感染慢充的果蝇一律处死，不得进入新的培养瓶），一般每瓶接5~10对种蝇即可。培养瓶外贴标签，著名原种名称、接种时间。

2.2.7收集处女蝇的方法

选择生长良好，含有较多即将羽化的蛹的培养瓶，清除瓶中所有成蝇。8~12小时内（8小时更可靠）从瓶中收集幼蝇，麻醉（时间不宜过长），收集的雌蝇即为处女蝇。果蝇刚孵化没有发育完全，可根据外生殖器结果分辨雌雄。处女蝇单独存放在一新的培养瓶内。反复收集，直到足够为止。一个杂交试验通常收集5~10只处女蝇即可。

3 讨论

判断雌雄果蝇可先以外生殖加以判断，再通过性梳检查。

饲养果蝇的培养基须完全凝固，否则粘住果蝇致其死亡（尤其麻醉未苏醒的处女蝇）。

刚孵化的幼蝇，可能体色很浅，翅膀很短且卷曲，容易误认成突变体，须多培养几天。新收到的处女蝇应存放几天以检查“处女性”。如培养3~5天瓶中出现幼虫则说明手机失败，需要重新收集。

参考文献

[1] 果蝇综合大实验：性状观察及杂交实验设计

[2] Genetics Lab 实验四果蝇的外部形态观察及饲养技术

[3]果蝇培养、麻醉雌雄鉴别生物网 2009-10-28