前列腺抗原酶促化学发光免疫分析方法学的建立

"卷第"期原子能科学技术#$%&!"!’$&"!"(()年"月*+$,-./012345.-10.160781.90$%$34

:1;&"(()前列腺抗原酶促化学发光免疫分析方法学的建立

张雪峰!刘一兵!贾娟娟!许!李子颖!陈永利!韩世泉

"中国原子能科学研究院同位素研究所!北京!<("!<=

$摘要!应用鲁米诺E

过氧化氢发光体系建立定量测定血清前列腺特异性抗原含量的酶促化学发光免疫分析方法%该方法测量范围为<&C #)($3,B !灵敏度为(&<"$3

,B !批内变异/C ]!批间变异/>>%本方法与免疫放射分析方法的相关方程4c G %

关键词!酶促化学发光免疫分析方法#前列腺特异性抗原#单克隆抗体

中图分类号!@F >G &=!!!文献标志码!*!!!文章编号!<(((E F >=<""(()$("E (<<"E (C

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作者简介!张雪峰"<>)=’$!男!吉林省吉林市人!硕士研究生!免疫分析专业?$/2

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!!前列腺特异性抗原"

b 5*$是由前列腺上皮细胞和尿道周围腺体产生的一种相对分子质量

为=&=#=&C 万道尔顿的单链糖蛋白%正常情

况下!b 5*主要存在于前列腺液和精液中!

血液中浓度很低"(#!$3

,B $%当前列腺病变时!b 5*进入血液!引起血液b 5*浓度升高!因此!b 5*检测技术应用于前列腺疾病的诊断*疗效观察和愈后判断(@!实验仪器和试剂

@&@!主要仪器

发光检测仪及其软件为S6%%6.公司产品#伽玛计数器"R*HH*E L<"$!?b L公司#<"F( (型I计数器"B f O$%

@&B!主要材料和试剂

辣根过氧化物酶"V@b$*吐温"8T110$*过氧化氢"V

"W"

$均为5-3,6产品#51Y9671\\ R E<((购自上海化学试剂厂"进口分装$#>F孔发光板购自深圳金灿华实业有限公司#牛血清白蛋白系上海赛达生物有限公司产品#包被单克隆抗体"b"G*<($和标记单克隆抗体"b"G O<$*发光底物*前列腺特异性抗原免疫放射分析试剂盒*前列腺特异性抗原放射免疫分析试剂盒均由中国原子能科学研究院原子高科医学二部提供%实验用化学试剂均为分析纯%

B!实验方法

B&@!抗原的纯化

b5*的制备和纯化参照文献(>)!精液进行低速和高速"次离心!低速"(((2,,-0离心=(,-0!高速")(((2,,-0离心=(,-0%对(&(<,$%,B*Y Vc G&)的82-U E V L%透析后!用51Y9671\\R E<((凝胶层析进行分离纯化!用放射免疫分析试剂盒对收集到的蛋白溶液进行鉴定并测定b5*含量%参照临床应用实际和其他分析方法标准品浓度的设置!结合酶促化学发光分析方法自身灵敏度高*检测范围宽等特点!最终将标准品浓度范围设定为<&C#)($3,B%

B&B!固相抗体的制备

用(&<,$%,B*Y Vc>&C的碳酸缓冲液"L O$稀释包被抗体至<(,3,B!并加入发光板"每孔"(($B$中%置!i过夜%次日!弃去包被液!拍

干%加入封闭液"含(&!]明胶!每孔"C($B$! =G i封闭<9%倒出封闭液!晾干备用%

B&A!酶标抗体的制备

采用改良高碘酸钠氧化法(<()制备b5*的酶标记物!辣根过氧化物酶与抗b5*标记单抗用量均为<,3%酶标记物经(&(<,$%,B* Y Vc G&!的b O于!i透析过夜后!加入等体积甘油于_"(i下保存备用%

A!实验结果

A&@!方法学建立

<$包被浓度的选择%包被抗b5*单克隆抗体b"G*<(!包被浓度分别为F*)*<(*<"* %表@!酶稀释度的选择

5*>+$@!,$+$;)&(3.&+-)&0(+$I$+07+*>$+$.N*>稀释度信噪比曲线相关系数

(&>>(

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8d"5?!并将此值代入曲线方程!求得灵敏度为(&<"$3,B%

"$精密度%重复测定含有不同b5*浓度的人血清标本!观察批内*批间变异!结果列于表"%

=$健全性%将<份高值b5*血清样品进行倍比稀释!稀释度与检测值呈线性相关!得到的相关方程为4c==!=8d(!>>!结果示于图!

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批内变异

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批间变异

平均值5?L#,] <=&!((&C&("(&F><&C!G&! ==<&&"

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<原子能科学技术!!第!"卷C$-弯钩.效应%当血清样品b5*浓度达到"C($3,B后!会出现-弯钩.效应"图C$%