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免疫组化实验流程

来源:动视网 责编:小OO 时间:2025-09-27 16:06:07
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免疫组化实验流程

免疫组织化学对1月龄以上大鼠,以10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,开胸,经主动脉灌流37℃生理盐水200ml,继以400ml4%多聚甲醛固定液(用0.1mol/L磷酸缓冲液(PB,pH7.4))灌流固定,取脑、神经垂体入上述固定液中后固定约6h(4℃)后转入30%蔗糖(用0.1mol/lPB配制,下同)4℃过夜。对出生后1天(P1)、7天(P7)和14天(P14)的新生鼠或幼鼠,直接取脑入固定液固定24h(4℃)后转入30%蔗糖4℃过夜,第2天行恒冷箱冰冻切片(30μm)。按下列步骤对切片进行免疫
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导读免疫组织化学对1月龄以上大鼠,以10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,开胸,经主动脉灌流37℃生理盐水200ml,继以400ml4%多聚甲醛固定液(用0.1mol/L磷酸缓冲液(PB,pH7.4))灌流固定,取脑、神经垂体入上述固定液中后固定约6h(4℃)后转入30%蔗糖(用0.1mol/lPB配制,下同)4℃过夜。对出生后1天(P1)、7天(P7)和14天(P14)的新生鼠或幼鼠,直接取脑入固定液固定24h(4℃)后转入30%蔗糖4℃过夜,第2天行恒冷箱冰冻切片(30μm)。按下列步骤对切片进行免疫
免疫组织化学

对1月龄以上大鼠,以10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,开胸,经主动脉灌流37℃生理盐水200ml,继以400ml 4%多聚甲醛固定液(用0.1mol/L磷酸缓冲液(PB, pH7.4))灌流固定,取脑、神经垂体入上述固定液中后固定约6h(4℃)后转入30%蔗糖(用0.1 mol/l PB配制,下同)4℃过夜。对出生后1天(P1)、7天(P7)和14天(P14)的新生鼠或幼鼠,直接取脑入固定液固定24h(4℃)后转入30%蔗糖4℃过夜,第2天行恒冷箱冰冻切片(30μm)。按下列步骤对切片进行免疫组织化学反应(ABC法):

⑴含1% Triton X-100和0.03 %H2O2的0.01 mol/L 磷酸盐缓冲液(PBS, pH7.4)室温30min;

⑵含3%牛血清白蛋白(BSA, Sigma)和1%正常羊血清(NGS, Vector)的0.01 mol/L PBS室温30min;

⑶兔抗HAP1-B多克隆抗体(1:50000,本实验室自制),或羊抗CHAT抗体(1:400,Temecula),室温孵育过夜。抗体用含3%牛血清白蛋白(BSA,Sigma)和1%NGS的0.01 mol/L PBS稀释(下同);

⑷0.01 mol/L PBS 漂洗3次,每次10min;

⑸生物素化羊抗兔IgG(1:200, Vector)或生物素化兔抗羊IgG(1:200,中杉金桥)室温2h;

⑹0.01 mol/L PBS 漂洗3次,每次10min;

⑺ABC(1:100, Vector) 室温2h;

⑻0.01 mol/L PBS 漂洗3次,每次10min;

⑼含0.03%DAB和0.006% H2O2的Tris盐酸缓冲液(TB, pH7.6)室温10~15 min。

⑽常规脱水、透明、树脂封片

免疫荧光双标

灌流固定动物、取切片后,按下列步骤对切片进行双标反应:

⑴含1 % Triton X-100和0.03 %H2O2的0.01 mol/LPBS室温30min;

⑵含3% BSA和2%正常驴血清(NDS)的0.01 mol/L PBS室温30min;

⑶羊抗CHAT(1:400)和兔抗HAP1抗体(1:50000) 室温过夜;

⑷0.01 mol/L PBS 漂洗3次,每次10min;

⑸Rodamine Red标记的豚鼠抗兔IgG(1:500)和FITC标记的抗羊IgG(1;200)室温3h(避光);

⑹0.01 mol/L PBS 漂洗3次,每次10min(避光);

⑺含20%甘油的0.01 mol/L PBS封片。

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免疫组化实验流程

免疫组织化学对1月龄以上大鼠,以10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,开胸,经主动脉灌流37℃生理盐水200ml,继以400ml4%多聚甲醛固定液(用0.1mol/L磷酸缓冲液(PB,pH7.4))灌流固定,取脑、神经垂体入上述固定液中后固定约6h(4℃)后转入30%蔗糖(用0.1mol/lPB配制,下同)4℃过夜。对出生后1天(P1)、7天(P7)和14天(P14)的新生鼠或幼鼠,直接取脑入固定液固定24h(4℃)后转入30%蔗糖4℃过夜,第2天行恒冷箱冰冻切片(30μm)。按下列步骤对切片进行免疫
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