总大肠菌群检验方法

在饮用水的微生物安全监测中，普遍采用正常的肠道细菌作为粪便污染指标，而不是直接测定肠道致病菌。

总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的，在37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的草兰氏阴性无芽胞杆菌。总大肠菌群数系指每升水样中所含有的总大肠菌群的数目。总大肠菌群可用多管发酵法。

多管发酵法

1、原理

根据总大肠菌群应具有的生物特性，如草兰氏阴性无芽胞杆菌，在37℃24h内能发酵乳糖并产酸产气，能在选择性培养基上产生典型菌落。

2、仪器

显微镜

草兰氏染色用有关器材

高压蒸汽灭菌器

干热灭菌箱

恒温箱

冰箱

放大镜

试管。平皿（直径9cm）刻度吸管等。置于干热灭菌箱中160℃灭菌2h。

3、培养基

乳糖蛋白胨培养液

成分：蛋白胨         10g

牛肉膏         3g

乳  糖         5g

氯化钠         5g

1.6%溴甲酚紫乙醇溶液      1ml

蒸馏水         1000ml

制法：将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠置于1000ml蒸馏水中加热溶解，调整PH为7.2—7.4，再加入1ml1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管管中，置于高压蒸汽灭菌器中，以115℃灭菌20min，贮存于冷暗处备用。

三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液

按上述乳糖蛋白胨培养液浓缩三倍配制。

4、步骤

初发酵试验：在2个各装有已灭菌的50ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的大试管（内有导管）内以无菌操作各加入水样100ml；在10支装有已灭菌5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管），以无菌操作各加入水样10ml；混匀后置于37℃恒温箱内培养24h。

表：总大肠菌群数检数表

[接种水样总量300ml（100ml12份，10ml10份）]